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Avaliação do papel de óxido nítrico, de óleos essenciais e de sanitizantes na dispersão de biofilmes de Listeria monocytogenes em superfície abiótica

Processo: 10/10051-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de setembro de 2010
Vigência (Término): 31 de julho de 2014
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
Pesquisador responsável:Elaine Cristina Pereira de Martinis
Beneficiário:Fernanda Barbosa dos Reis Teixeira
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Óleos essenciais   Biofilmes   Óxido nítrico   Listeria monocytogenes   Microbiologia de alimentos

Resumo

Biofilmes de Listeria monocytogenes são fontes potenciais de contaminação de alimentos processados e podem impedir a realização de procedimentos efetivos de higienização e sanitização nas indústrias. No presente estudo foi avaliada a estrutura e a dispersão de biofilmes formados por duas cepas de L. monocytogenes em diferentes superfícies, como aço inoxidável, vidro e poliestireno. Foram utilizados diferentes sistemas de cultivo como microplacas de 96 poços de poliestireno e de aço inoxidável, microplacas de 24 poços contendo lâminas circulares de aço inoxidável ou de vidro e, câmaras de poliestireno contendo 8 poços com fundo de borossilicato - vidro. Os experimentos foram realizados com incubação por 1, 4 e 8 dias a 25°C. A formação de biofilme foi verificada em microplacas de 96 de poliestireno e de aço inoxidável através do método de quantificação de biomassa do biofilme por coloração com cristal violeta, e também em sistema de microplaca de 24 poços contendo lâminas circulares de aço inoxidável ou de vidro, através de enumeração em placas contendo meio de cultura das células aderidas nas superfícies. As estruturas dos biofilmes foram observadas por meio de microscopia de fluorescência (para o sistema de microplaca de 24 poços contendo lâminas circulares de aço inoxidável) e através de microscopia confocal a laser (para o sistema com câmaras com fundo de vidro). Para isso, os biofilmes foram corados com o kit de viabilidade bacteriana LIVE/DEAD®, a fim de diferenciar as células viáveis (coradas com Syto 9) das células mortas (coradas com iodeto de propídeo), sendo feita a estimativa do número de células viáveis aderidas à superfície de vidro através de quantificação por fluorescência. Foram realizados testes de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) de óleos essenciais de plantas de Cymbopogon citratus (capim-limão) e de Zingiber officinale (gengibre) e de dois sanitizantes comerciais (um à base de óleo de coco babaçu e outro à base de dióxido de cloro) frente a L. monocytogenes. Posteriormente, foi testada a eficácia desses antimicrobianos na remoção de biofilmes de L. monocytogenes formados por 4 e 8 dias a 25ºC, em superfície de aço inoxidável e de vidro, através da enumeração em placas de células aderidas e de observações microscópicas. Foi também avaliada a presença de moléculas relacionadas ao estresse oxidativo e nitrosativo em biofilmes maduros de duas cepas de L. monocytogenes formados em superfícies de aço inoxidável e de vidro, para o estudo do possível envolvimento do óxido nítrico (NO) exógeno e de inibidores de NO na indução da dispersão de células do biofilme e na alteração dos níveis de expressão de genes de L. monocytogenes relacionados ao estresse oxidativo e nitrosativo (Lmo0990, Lmo0807 e Lmo1485), bem como à regulação dos genes de virulência e formação de biofilme (PrfA). Foi verificada a presença de intermediários de oxigênio reativo (ROI - reactive oxygen intermediates) e de intermediários de nitrogênio reativo (RNI - reactive nitrogen intermediates) nos biofilmes de L. monocytogenes com 4 e 8 dias de incubação a 25ºC formados em superfícies de aço inoxidável e de vidro, por meio de marcadores fluorescentes específicos e visualizações microscópicas. A fim de confirmar indiretamente a presença de óxido nítrico (NO) em cultivos de L. monocytogenes incubados por 4 e 8 dias a 25ºC, foi realizada a dosagem de nitrito através da reação com reagente Griess. Foram realizados testes de concentração inibitória mínima (CIM) do doador de óxido nítrico nitroprussiato de sódio (SNP) e dos inibidores de NO Nw-Nitro-L-arginina metil éster (L-NAME) e 2-(4-carboxifenil)-4,4,5,5-tetrametilimidazoline-1-oxi-3-óxido (Carboxi-PTIO sal de potássio, C-PTIO) frente a L. monocytogenes. Foi testada a eficácia do SNP e dos inibidores de NO na remoção de biofilmes pré-formados por 4 e 8 dias de L. monocytogenes em superfície de aço inoxidável. (AU)

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
REIS-TEIXEIRA, FERNANDA BARBOSA; SOUSA, INGRID PONTES; ALVES, VIRGINIA FARIAS; JACOMETTI CARDOSO FURTADO, NIEGE ARACARI; PEREIRA DE MARTINIS, ELAINE CRISTINA. Evaluation of lemongrass and ginger essential oils to inhibit Listeria monocytogenes in biofilms. JOURNAL OF FOOD SAFETY, v. 39, n. 4 AUG 2019. Citações Web of Science: 0.
DOS REIS-TEIXEIRA, FERNANDA BARBOSA; CONCEICAO, NATALIA; DA SILVA, LILIAN PEREIRA; ALVES, VIRGINIA FARIAS; PEREIRA DE MARTINIS, ELAINE CRISTINA. Potential of oxygen and nitrogen reactive intermediates to disperse Listeria monocytogenes from biofilms. Brazilian Journal of Microbiology, v. 50, n. 2, p. 501-506, APR 2019. Citações Web of Science: 0.
DOS REIS-TEIXEIRA, FERNANDA BARBOSA; ALVES, VIRGINIA FARIAS; PEREIRA DE MARTINIS, ELAINE CRISTINA. Growth, viability and architecture of biofilms of Listeria monocytogenes formed on abiotic surfaces. Brazilian Journal of Microbiology, v. 48, n. 3, p. 587-591, JUL-SEP 2017. Citações Web of Science: 19.
WINKELSTROETER, LIZZIANE KRETLI; DOS REIS TEIXEIRA, FERNANDA BARBOSA; SILVA, ELIANE PEREIRA; ALVES, VIRGINIA FARIAS; PEREIRA DE MARTINIS, ELAINE CRISTINA. Unraveling Microbial Biofilms of Importance for Food Microbiology. MICROBIAL ECOLOGY, v. 68, n. 1, SI, p. 35-46, JUL 2014. Citações Web of Science: 22.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
TEIXEIRA, Fernanda Barbosa dos Reis. Avaliação do papel de óxido nítrico, de óleos essenciais e de sanitizantes na dispersão de biofilmes de Listeria monocytogenes em superfície abiótica. 2014. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Ribeirão Preto.

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