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Neuroimunologia, genômica funcional e neuroimagem: uma abordagem integrada no estudo da fisiopatologia e tratamento da epilepsia refratária

Processo: 10/20176-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de janeiro de 2011
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2012
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Convênio/Acordo: FAPEMIG
Pesquisador responsável:Edson Amaro Junior
Beneficiário:Vanessa Poccetti Ribeiro
Instituição-sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:09/53443-1 - Neuroimunologia, genômica funcional e neuroimagem: uma abordagem integrada no estudo da fisiopatologia e tratamento da epilepsia refratária, AP.TEM
Assunto(s):Genômica funcional   Neuroimagem   Epilepsia   Pediatria

Resumo

A bolsista será treinada no Laboratório de Genômica Pediátrica do Depto. de Pediatria da FMUSP e no INRAD-HC-FMUSP para atuar na coleta e armazenamento de material biológico e coleta de dados clínicos dos pacientes incluídos nos estudos de imagem e expressão gênica em epilepsia refratária do lobo temporal previstos neste projeto. Essas atividades são descritas a seguir. 1. Coleta e preservação de material biológico: As amostras de pacientes com Epilepsia Refratária do Lobo Temporal Mesial (ERLTM) estão sendo obtidas junto ao Grupo de Cirurgia para Epilepsia do HC-FMUSP, sob supervisão do Dr. Wen Hung-Tzu. Os tecidos foram preservados imediatamente em RNAlater - RNA Stabilization Reagent - QIAgen (extração de RNA) e Allprotect Tissue Reagent - QIAgen (extração de DNA genômico). As amostras coletadas pela equipe coordenada pelo Prof. Marco A. Romano-Silva, da UFMG serão processadas de forma idêntica e enviadas para São Paulo para obtenção de RNA e DNA e análise genômica. Durante o ato cirúrgico serão coletadas amostras de tecido do giro parahipocampal e do giro denteado do hipocampo de pacientes com ERLTM submetidos à hipocampectomia para obtenção de RNA a ser utilizado em estudos de expressão gênica. Serão também coletadas amostras de córtex desses pacientes para obtenção de DNA. Após a remoção do hipocampo, a peça cirúrgica foi coletada e preservada em paraformol 4% (sendo transferida para paraformol 1% após 48h) para estudos de imagem (ressonância magnética) e histologia. 2. Processamento e armazenamento de material biológico: 2.1. Extração do RNA total: O RNA será extraído do tecido com RNeasy Lipid Tissue Mini Kit para 50 extrações, segundo as instruções do fabricante (número de catálogo 74804 - Qiagen). Para avaliar a integridade do RNA extraído, todas as amostras são analisadas por Bioanalyzer 2100 - Agilent Technologies, observando-se a presença das bandas correspondentes aos RNA ribossômicos 18 e 28S. Todas as amostras que apresentarem valores de RIN acima de 7.0, serão consideradas adequadas para estudos de expressão gênica. As amostras serão armazenadas a -80ºC. 2.2. Extração do DNA total: O DNA será extraído de fragmentos do córtex frontal removido durante a cirurgia utilizando o kit QIAmp DNA Mini Kit para 50 reações, seguindo as instruções do fabricante (número de catálogo 51304 - Qiagen). A qualidade das amostras de DNA será verificada no aparelho NanoVue (GE-Healthcare) e as amostras serão armazenadas a -20º C. 2.3. Preparo do hipocampo para análise de imagem: O hipocampo será fixado inicialmente em paraformol 4% e após 48 horas será transferido para outra solução de paraformol 1%. Esse material é imediatamente enviado para análise de imagem (MRI) e, posteriormente, é feita a análise histológica. 3. Documentação do Projeto FAPESP-FAPEMIG: Serão coletadas as informações dos prontuários dos pacientes com ERLTM submetidos a hipocampectomia verificando-se: insulto precipitante da doença, idade da primeira crise, histórico familial e hemisfério cerebral afetado. Os dados coletados serão codificados para se impedir a identificação do paciente e arquivados eletronicamente. (AU)

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