Obtenção e caracterização de anticorpos monoclonais recombinantes (scFv) contra a toxina termo-estável (st) de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC)

• Processo: 10/14659-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2011
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Roxane Maria Fontes Piazza
• Beneficiário: Caio Raony Farina Silveira
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Técnicas e procedimentos diagnósticos Testes imunológicos Escherichia coli enterotoxigênica Expressão gênica Anticorpos monoclonais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: anticorpo monoclonal | clonagem scFv | diagnóstico | Etec | expressão | Imunodiagnóstico

Resumo

Amostras de Escherichia coli associadas à gastroenterite são conhecidas como Escherichia coli diarreiogênicas. Dentre elas destaca-se a E. coli enterotoxigênica (ETEC), responsável por cerca de 400 milhões de episódios de diarréia e 700.000 mortes de crianças com menos de cinco anos de idade anualmente, sendo também a principal causa da chamada "diarréia dos viajantes", que acomete turistas em trânsito em regiões onde a infeccção é endêmica. A identificação da ETEC tem sido feita através da detecção de seus principais fatores de virulência: as enterotoxinas termo-lábil (LT) e termo-estável (ST), através de técnicas de biologia molecular ou ensaios imunossorológicos. Quando comparados a outros métodos de detecção, os ensaios imunossorológicos apresentam diversas vantagens por serem testes rápidos, de fácil execução, incluindo alta especificidade e sensibilidade. Apesar dos anticorpos monoclonais apresentarem diversas qualidades, como homogeneidade e especificidade, além do fato de serem produzidos ilimitadamente, a produção desses anticorpos requer o uso de animais, cultura de células especializadas e um extensivo envolvimento de tempo e trabalho. Uma alternativa para substituí-los é a obtenção de um anticorpo recombinante, objetivo deste trabalho, com sensibilidades e afinidades desejáveis, que possam ser produzidos com baixo custo e em larga escala. Esta abordagem requer a clonagem e expressão das regiões variáveis das cadeias leve e pesada de um anticorpo unidas por um polipeptídeo flexível (linker). Após extração de RNA total de hibridomas produtores de anticorpos anti-ST e transcrição reversa, as cadeias leve e pesada foram amplificadas por PCR e unidas por um linker de DNA para obtenção do inserto scFv-ST. Após sequenciamento, um gene sintético foi sintetizado, com otimização de códons para expressão em cepas de Escherichia coli. No presente projeto esse gene será amplificado e subclonado em vetor de expressão e células E. coli serão transformadas com o plasmídio recombinante que serão induzidas para sua expressão e caracterização quanto a sua funcionalidade e estrutura, uma vez obtida, essa molécula deverá ser utilizada como ferramenta na detecção de ETEC. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

OZAKI, CHRISTIANE Y.; SILVEIRA, CAIO R. F.; ANDRADE, FERNANDA B.; NEPOMUCENO, ROBERTO; SILVA, ANDERSON; MUNHOZ, DANIELLE D.; YAMAMOTO, BRUNO B.; LUZ, DANIELA; ABREU, PATRICIA A. E.; HORTON, DENISE S. P. Q.; et al. Single Chain Variable Fragments Produced in Escherichia coli against Heat-Labile and Heat-Stable Toxins from Enterotoxigenic E-coli. PLoS One, v. 10, n. 7, JUL 8 2015. (11/12928-2, 10/14659-6, 06/60258-8, 11/22108-2, 11/24111-0, 04/08297-3)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

SILVEIRA, Caio Raony Farina. Uma nova ferramenta para o diagnóstico de Escherichia coli enterotoxigênica: obtenção de anticorpos recombinantes contra a toxina termoestável.. 2013. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.