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Geração e análise da imunogenicidade de proteínas recombinantes baseadas nas diferentes formas do antígeno circumsporozoíta de Plasmodium vivax visando o desenvolvimento de uma vacina universal contra malária

Processo: 11/02098-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de maio de 2011
Vigência (Término): 31 de março de 2013
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada
Pesquisador responsável:Maurício Martins Rodrigues
Beneficiário:Cibele Aparecida Tararam
Instituição-sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:09/15132-4 - Geração e análise da imunogenicidade de proteínas recombinantes baseadas nas diferentes formas do antígeno circumsporozoíta de Plasmodium vivax visando o desenvolvimento de uma vacina universal contra malária, AP.TEM
Assunto(s):Adenovirus   Vacinas   Vacinas sintéticas   Malária

Resumo

Como parte do projeto de imunização com proteínas recombinantes contendo epítopos imundominantes da proteína CS de Plasmodium vivax será meu plano de trabalho de pós-doutoramento a geração de adenovírus recombinantes defeituosos em replicação de origem humano (adenovirus humano 5) e símio (Adenovírus símio 9). Realizaremos estas etapas do projeto com a colaboração de dois excelentes especialistas da área de adenovírus recombinantes. O adenovírus tipo 5 humano será realizado em colaboração com o Dr. Oscar Bruna-Romero da Universidade Federal de Minas Gerais o qual já mantemos colaboração nos últimos 5 anos. O adenovírus tipo 9 símio será feito em colaboração com a Dra. Hildegund C.J. Ertl, do Wistar Institute (University of Pennsylvania School of Medicine). No segundo caso, pretendo ir gerar o adenovírus recombinante em visita ao laboratório da Dra. Ertl no qual pretendo trabalhar de 6 a 12 meses. Pretendemos cumprir as seguintes etapas:1)Obtenção de um gene sintético com a otimização de códon para expressão em células humanas da proteína CS de P. vivax contendo todas as três regiões imunodominantes em fusão num mesmo poli-peptídeo;2)Clonagem deste gene sintético no vetor pShuttle Clontech E1006-2 e inserção do cassete de expressão no clone molecular AdC9 ou AdHu5.3)Identificação de vetores recombinantes em bactérias transformadas e inserção no clone molecular no AdC9 ou AdHu5; 4)Transfecção de células HEK 293 para a recuperação viral;5)Expansão em células HEK 293 dos adenovírus recombinantes. 6)Caracterização da expressão do produto transgênico por immunobloting após a infecção in vitro de células CHO-CAR 7)Utilização dos adenovírus recombinantes em protocolos de vacinação do tipo prime e boost heterólogos em camundongos isogênicos. Ao final deste projeto esperamos ter pelo menos dois novos adenovírus recombinantes que poderão ser utilizados para vacinações pré-clinicas.