Geração e análise da imunogenicidade de proteínas recombinantes baseadas nas diferentes formas do antígeno circumsporozoíta de Plasmodium vivax visando o desenvolvimento de uma vacina universal contra malária

• Processo: 11/02098-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Vigência (Início): 01 de maio de 2011
• Vigência (Término): 31 de março de 2013
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Maurício Martins Rodrigues
• Beneficiário: Cibele Aparecida Tararam
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 09/15132-4 - Geração e análise da imunogenicidade de proteínas recombinantes baseadas nas diferentes formas do antígeno circumsporozoíta de Plasmodium vivax visando o desenvolvimento de uma vacina universal contra malária, AP.TEM
• Assunto(s): Adenovirus Vacinas Vacinas sintéticas Malária
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: adenovirus | malária | proteína cs | Vacinas | Vacinas recombinantes

Resumo

Como parte do projeto de imunização com proteínas recombinantes contendo epítopos imundominantes da proteína CS de Plasmodium vivax será meu plano de trabalho de pós-doutoramento a geração de adenovírus recombinantes defeituosos em replicação de origem humano (adenovirus humano 5) e símio (Adenovírus símio 9). Realizaremos estas etapas do projeto com a colaboração de dois excelentes especialistas da área de adenovírus recombinantes. O adenovírus tipo 5 humano será realizado em colaboração com o Dr. Oscar Bruna-Romero da Universidade Federal de Minas Gerais o qual já mantemos colaboração nos últimos 5 anos. O adenovírus tipo 9 símio será feito em colaboração com a Dra. Hildegund C.J. Ertl, do Wistar Institute (University of Pennsylvania School of Medicine). No segundo caso, pretendo ir gerar o adenovírus recombinante em visita ao laboratório da Dra. Ertl no qual pretendo trabalhar de 6 a 12 meses. Pretendemos cumprir as seguintes etapas:1)Obtenção de um gene sintético com a otimização de códon para expressão em células humanas da proteína CS de P. vivax contendo todas as três regiões imunodominantes em fusão num mesmo poli-peptídeo;2)Clonagem deste gene sintético no vetor pShuttle Clontech E1006-2 e inserção do cassete de expressão no clone molecular AdC9 ou AdHu5.3)Identificação de vetores recombinantes em bactérias transformadas e inserção no clone molecular no AdC9 ou AdHu5; 4)Transfecção de células HEK 293 para a recuperação viral;5)Expansão em células HEK 293 dos adenovírus recombinantes. 6)Caracterização da expressão do produto transgênico por immunobloting após a infecção in vitro de células CHO-CAR 7)Utilização dos adenovírus recombinantes em protocolos de vacinação do tipo prime e boost heterólogos em camundongos isogênicos. Ao final deste projeto esperamos ter pelo menos dois novos adenovírus recombinantes que poderão ser utilizados para vacinações pré-clinicas.