Bioprospeccao dentre compostos de origem natural de inibidores especificos do proteassoma 20s seguida da determinacao de atividade pro-apoptotica e anti-tumoral em cultura de celulas tumorais.

• Processo: 05/01372-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2005
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia
• Pesquisador responsável: Marilene Demasi
• Beneficiário: Angelino Lima Felício
• Instituição Sede: Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 04/07636-9 - Rastreamento de inibidores específicos de proteassoma seguidos da determinação de propriedades pró-apoptóticas e antitumorais em cultura celular, AP.BTA.R
• Assunto(s): Bioprospecção Apoptose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Apoptose | Efeito Anti-Tumoral | Inobidores De Proteassoma 20S | bioprospecção

Resumo

Os inibidores do proteassoma promovem morte celular em células de mamíferos por processo descrito, em muitos casos (dependendo de linhagem celular e dose), como apoptose. Esta atividade por parte de inibidores específicos da protease tem sido explorada como potencialmente benéfica na quimioterapia de diversos tumores incluindo-se os sólidos e hematológicos. Com destaque na literatura científica recente está o inibidor sintético denominado de bortezomibe recentemente introduzido na clínica médica. O projeto, no qual a presente solicitação está inserida, tem por objetivo identificar dentre os produtos naturais disponibilizados pelo programa BIOTA e dentre toxinas animais disponíveis no Institutto Butantan, compostos que sejam inibidores seletivos e reversíveis do proteassoma 20S. A metodologia a ser utilizada implica em microensaios e prevê o screening de extratos fracionados e derivados isolados. Consistirá na medida da atividade do proteassoma na presença desses produtos por intermédio de ensaios em microplacas, sendo que o proteassoma é isolado por cromatografia de afinidade de uma linhagem de S. cerevisiae onde uma das subunidades do complexo catalítico 20S é modificada com uma cauda de poli-histidina e seqüência FLAG. A segunda fase do projeto prevê o estudo da seletividade dos inibidores potenciais encontrados na primeira etapa. A seletividade dos inibidores será avaliada por meio de ensaios de imunoprecipitação e de cinética enzimática. Após a identificação e seleção dos inibidores específicos do proteassoma, será feita avaliação da atividade pró-apoptótica desses compostos. Os ensaios nessa fase do projeto serão realizados em cultura de células tumorais de diversas linhagens onde será avaliada a viabilidade celular e feita a caracterização do processo apoptótico por meio de ensaios já consolidados na literatura.