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Efeito da inibicao das oxido nitrico sintases na expressao das moleculas de adesao e na secrecao de citocinas em camundongos alergicos.

Processo: 06/00963-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Vigência (Início): 01 de maio de 2006
Vigência (Término): 30 de abril de 2007
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Farmacologia
Pesquisador responsável:Heloisa Helena de Araujo Ferreira
Beneficiário:Adriano Pires Ribeiro
Instituição-sede: Pró-Reitoria Acadêmica. Universidade São Francisco (USF). Campus Bragança Paulista. Bragança Paulista , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:05/50932-0 - Efeito da inibicao das oxido nitrico sintases na expressao das moleculas de adesao e na secrecao de citocinas em camundongos alergicos., AP.R
Assunto(s):Camundongos   Citocinas   Óxido nítrico   Inflamação   Moléculas de adesão celular   Eosinófilos

Resumo

RESUMO PROJETO DE PESQUISAEfeito da inibição das óxido nítrico sintases na expressãodas moléculas de adesão e na secreção de citocinas emcamundongos alérgicos (Processo Nº 2005/50932-0)O óxido nítrico (NO), mediador de grande importância nas doenças alérgicas das viasrespiratórias, é sintetizado a partir da L-arginina pela família de enzimas óxido nítrico sintases(NOS) constitutivas, neuronal (bNOS) e endotelial (eNOS), e induzível (iNOS). A influência doNO na expressão das moléculas de adesão e na secreção de citocinas envolvidas na migração deeosinófilos não está totalmente esclarecida. Utilizando modelo de ratos alérgicos com bloqueioda síntese de NO, pelo tratamento com L-NAME, demonstramos recentemente que a redução doinfiltrado eosinofílico no pulmão de ratos é decorrente do retardamento do efluxo doseosinófilos da medula óssea para o sangue e pulmões, possivelmente pela modulação daintegrina 41 (VLA-4). Em outro estudo, verificamos ausência de expressão da iNOS e eNOSnos eosinófilos de pacientes com rinite alérgica, sugerindo que o NO nestas células sejaproduzido pela bNOS. O presente estudo tem como objetivo pesquisar a influência das NOSconstitutivas e induzível na expressão de moléculas de adesão nos eosinófilos e na secreção decitocinas. Serão utilizados camundongos Balb/C tratados de forma aguda com inibidores nãoseletivos das NOS, o L-NAME, e seletivos para iNOS, o 1400 W, sensibilizados e desafiadoscom ovalbumina (OVA). A migração de eosinófilos para os pulmões será verificada em 6, 14,48 e 72h após o desafio. A expressão/função das moléculas de adesão VLA-4, Mac-1 e LFA-1nos eosinófilo obtidos dos camundongos será verificada por experimentos de adesão in vitro,utilizando placas recobertas com fibronectina, VCAM-1 e ICAM-1 e por citometria de fluxo. Averificação dos níveis das citocinas eotaxina, IL-5, IL-13 E TNF-será feita nos pulmãohomogeneizados e no LBA obtidos dos camundongos e mantido a –80°C, utilizando kitscomerciais de Elisa. A produção de NO nos pulmões será verificada pela dosagem de nitrito noslavados broncoalveolares congelados.