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Análise da mutação V600E do gene BRAF em punção aspirativa com agulha fina (PAAF) de nódulo tireoidiano com diagnóstico suspeito ou de carcinoma papilífero

Processo: 09/17907-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Vigência (Início): 01 de janeiro de 2010
Vigência (Término): 28 de fevereiro de 2010
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
Pesquisador responsável:Suemi Marui
Beneficiário:Beatriz Marinho de Paula Mariani
Instituição-sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:09/07544-0 - Análise da mutação V600E do gene BRAF em punção aspirativa com agulha fina (PAAF) de nódulo tireoidiano com diagnóstico suspeito ou de carcinoma papilífero, AP.R
Assunto(s):Endocrinologia   Glândula tireoide   Técnicas de laboratório clínico   Extração de DNA   Técnicas de genotipagem   Coleta de dados

Resumo

Plano de Atividades para Bolsa de Treinamento: O Bolsista será responsável pelos seguintes itens: 1. Amostra obtida de PAAF de nódulo(s) tireoidiano(s); - Coleta de parte do material aspirado pelo médico responsável, durante o procedimento de PAAF. - Armazenamento das amostras a -20 º C. O bolsista fará a coleta dos seguintes dados antes de se realizar a PAAF: sexo, idade ao diagnóstico. 1.a. Extração de DNA das amostras de aspirado de PAAF; - Extração do DNA das amostras obtidas de PAAF, utilizando o Kit QIAamp DNA Micro Kit (Qiagen, Chatsworth, CA) e seguindo as instruções do fabricante. - A quantificação de DNA das amostras através de leitura em espectrofotômetro Nano Drop 1000 Overview (Thermo Fisher Scientific). - Diluição das amostras com água destilada para uma concentração final de 10 ng/¼L, para serem utilizadas na técnica de genotipagem de SNPs por PCR em tempo real.1b. Estudo da mutação V600E através de genotipagem de SNP por PCR em tempo real: - O Bolsista realizará todas as reações de PCR em tempo real para genotipagem (SNP) da mutação V600E e do controle para o tecido tireoidiano (gene TSH-R) e as analises utilizando o programa StepOne software versão 2.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA). 2. Extração de DNA a partir de material obtido em cirurgia; - Nos pacientes encaminhados para a realização de tireoidectomia, o bolsista fará a coleta e armazenamento em nitrogênio líquido, de um pequeno fragmento do nódulo. - Extração de DNA do material obtido em cirurgia. - Nos casos em que não for possível, o Bolsista fará as avaliações em material armazenado em parafina, sendo responsável também pela extração do DNA deste material. 2a. Análise da Mutação V600E em tecido nodular; - O Bolsista realizará a técnica de PCR nas amostras de DNA obtidas de tecido fresco ou de material parafinado. Após a PCR os produtos amplificados serão seqüenciados automaticamente em ABI Prism 3130 xl (Applied Biosystems, Foster City, CA) e as análises dos resultados será feita utilizando o programa Sequence Scanner v1.0 (Applied Biosystems, Foster City, CA). 3. Dados Clínicos, Laboratoriais e Ultrassonográficos: O Bolsista acompanhará as análises clínicas e laboratoriais de todos os pacientes. 4. Análise estatística. O Bolsista acompanhará as análises estatísticas realizadas pela pesquisadora responsável (Dra. Suemi Marui), juntamente com o auxílio de um estatístico. 5. Relatório Científico. O Bolsista participará na elaboração dos relatórios científicos exigidos durante a vigência do auxílio.