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Caracterização funcional de fosfolipases A2 ácidas tóxicas e não-tóxicas de venenos de serpentes

Processo: 09/05226-1
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Vigência (Início): 01 de julho de 2009
Vigência (Término): 31 de março de 2011
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
Pesquisador responsável:Andreimar Martins Soares
Beneficiário:Erika Andrea Bastos Soares
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:07/01433-7 - Caracterização funcional e estrutural de fosfolipases A2 ácidas tóxicas e não-tóxicas de venenos de serpentes, AP.R
Assunto(s):Venenos de serpentes   Purificação   Proteínas   Fosfolipases A2

Resumo

Os venenos de serpentes do gênero Bothrops são ricos em fosfolipases A2 (PLA2s).As PLA2s básicas miotóxicas têm sido subdivididas em dois subgrupos: as proteínasAsp49, cataliticamente ativas usando Ca2+ como cofator; e as Lys49, inativas sobresubstratos artificiais. A ausência de atividade catalítica não afeta a miotoxicidade. Por outrolado, as PLA2s ácidas presentes nos venenos de serpentes deste gênero foram poucoestudadas e pouco se sabe sobre o mecanismo de ação destas enzimas. Estas enzimas ácidasisoladas de venenos botrópicos, geralmente, não apresentam toxicidade experimental, mas,induzem importantes efeitos farmacológicos como inflamação, inibição da agregaçãoplaquetária e hipotensão arterial. Mais recentemente, algumas enzimas ácidasdemonstraram induzir efeito miotóxico e citotóxico, portanto, resolvemos investigar qualseria os possíveis resíduos de aminoácidos e/ou domínio estrutural envolvidos com estasatividades. As PLA2s ácidas de venenos de serpentes ainda não foram claramentecaracterizadas do ponto de vista da relação estrutura-função, fazendo com que nos últimosanos aumentasse o interesse sobre seus estudos. O projeto propõe estudos bioquímicos,farmacológicos e estruturais comparativos entre as fosfolipases A2 ácidas tóxicas e nãotóxicasisoladas, recentemente em nosso laboratório, de venenos de serpentes na tentativade melhor compreender o(s) possível(eis) mecanismo(s) de ação(ões) destas enzimas namiotoxicidade e citotoxicidade. Dentro deste contexto, este projeto propõe uma análisefuncional e estrutural comparativa das PLA2s ácidas tóxicas e não-tóxicas isoladas dosvenenos de Bothrops moojeni (BmooTX-I, PLA2 ácida tóxica e Bmoo-I-PLA2, não-tóxica),B. (n.) pauloenis (BpPLA2 ácida tóxica) e B. pirajai (BpirPLA2 ácida não-tóxica),avaliando: (i)- Isolar e caracterizar bioquimicamente estas PLA2s ácidas nativasdiretamente do veneno; (ii)- Clonar e sequenciar os cDNAs das PLA2s ácidas, e expressaruma específica de B. moojeni (recPLA2); (iii)- Análise comparativa das propriedadestóxicas e farmacológicas das enzimas ácidas tóxicas e não-tóxicas nativas e recombinante;(iv)- O efeito citotóxico será avaliado sobre linhagens específicas de miotúbulos demúsculo esquelético; e (v)- Estudos da relação estrutura-função serão realizados por meiode: 1-Sequenciamento completo das estruturas primárias das PLA2s; 2-Síntese química depeptídeos das regiões N- e C-terminais; 3-Modificações químicas de aminoácidosespecíficos, e 4-Tentativa de elucidação da estrutura tridimensional destas diferentesproteínas por técnicas de cristalografia de raios X e modelagem molecular. Desta forma,este projeto permitirá a possível tentativa de melhor compreensão do mecanismo de açãodas PLA2s ácidas sobre a toxicidade, podendo colaborar para a geração de ferramentas paraa pesquisa básica e aplicada.

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