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Avaliação da participação de células T produtoras de IL-17 (Th17) na paracoccidioidomicose humana.

Processo: 11/00223-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Vigência (Início): 01 de fevereiro de 2011
Vigência (Término): 29 de fevereiro de 2012
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
Pesquisador responsável:Ronei Luciano Mamoni
Beneficiário:Eliane Luz Roos
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:08/09176-6 - Avaliação da participação de células T produtoras de IL-17 (Th17) na paracoccidioidomicose humana, AP.JP
Assunto(s):Paracoccidioidomicose   Células dendríticas   Neutrófilos

Resumo

A paracoccidioidomicose (PCM), causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, pode ser classificada em duas formas: a forma adulta (FA) com evolução de caráter crônico, acometendo principalmente os pulmões, pele e mucosa e a forma juvenil (FJ) caracterizada pelo acometimento do sistema fagocítico-mononuclear, mais grave e de evolução mais rápida. Indivíduos moradores da zona endêmica expostos ao P. brasiliensis, podem apresentar a PCM-infecção, considerada a forma de resistência da PCM. Indivíduos do grupo PI apresentam resposta imune celular preservada, produção aumentada de IFN-gama e baixa de IL-10, IL-4 e IL-5. Já os pacientes com PCM apresentam desde uma resposta celular preservada com baixa produção de anticorpos e IFN-g na doença unifocal, até uma resposta celular deprimida, com presença de grande número de eosinófilos, alta produção de anticorpos (IgG4 e IgE), IL-4, IL-5, IL-10 e TGF-b na FJ ou na FA multifocal. Essas características demonstram que a resposta imunológica de suscetibilidade ou resistência à PCM é em grande parte regulada por um balanço entre as respostas Th1 e Th2. Contudo, algumas características, como o fato de haver uma grande produção de mediadores inflamatórios e de IL-12p40, mas não de IL-12p70 e IFN-g, e da presença de infiltrado inflamatório, tanto no pulmão como em outros tecidos com um grande número de neutrófilos com atividade fungicida diminuída, não são explicadas por esse balanço. Essas características podem ser indícios da participação de células produtoras de IL-17 (Th17), uma subpopulação de linfócitos recentemente descrita. Tendo isso em vista, o objetivo desse projeto é avaliar a participação das células produtoras de IL-17 na PCM humana, tanto localmente por meio da análise de biópsias de mucosa oral e linfonodos e do lavado bronco alveolar, como no sangue periférico de pacientes com PCM confirmada. Objetivo geral do projeto: Avaliar a participação das células produtoras de IL-17 na PCM humana Objetivos específicos do projeto: - Avaliar a presença de células produtoras de IL-17 em biópsias de mucosa oral e linfonodos de pacientes com PCM confirmada. - Avaliar o número e o fenótipo de células produtoras de IL-17 no lavado bronco alveolar de pacientes com PCM e no sangue periférico antes e após o tratamento antifúngico. - Avaliar se monócitos expostos a diferentes cepas de P. brasiliensis (Pb18 e Pb265) e ligantes específicos de TLR2, TLR4 e dectina-1 são capazes de induzir células T CD4+ de memória (CD45RO+) de pacientes tratados para a produção de IL-17. - Avaliar se células dendríticas derivadas de monócitos e expostas a leveduras e ao antígeno celular de P. brasiliensis apresentam a capacidade de induzir a diferenciação de células T CD4+ naive (CD45RA+) em células Th17. - Avaliar os mecanismos envolvidos na sinalização de células Th17 diferenciadas nas condições descritas acima por meio da análise de proteínas sinalizadoras (STAT3, STAT1, STAT4, STAT6) - Avaliar se a ativação de células dendríticas por leveduras de P. brasiliensis ocorre por meio de TLRs (TLR2 e TLR4) e/ou pela dectina-1. - Avaliar o efeito da IL-17 sobre a capacidade fungicida de neutrófilos contra a cepa virulenta (Pb18) e avirulenta (Pb265) de P. brasiliensis. Plano de trabalho: O aluno de capacitação técnica (TT-3) irá participar auxiliando na realização dos diferentes experimentos desenvolvidos no decorrer do projeto. Esse auxílio (supervisionado pelo responsável pelo projeto) será utilizado em todas as etapas do projeto (ver cronograma principal), tanto no que diz respeito ao preparo de reagentes e soluções, até a realização de experimentos como um todo (citometria de fluxo, cultura de células, western-blot, técnicas de biologia molecular, etc), dando assim ao bolsista uma visão geral dos procedimentos realizados durante uma investigação científica.