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Investigação dos efeitos da radiação UV na expressão, atividade e funções biológicas das GTPases da família Rho em linhagens tumorais de carcinoma de cérvix e melanoma humano

Processo: 11/05852-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Vigência (Início): 01 de abril de 2011
Vigência (Término): 31 de agosto de 2012
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Fábio Luis Forti
Beneficiário:Gisele Espinha Teixeira da Silva
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:08/58264-5 - Papel de GTPases da família Rho e de tirosina fosfatases duais no reparo de danos no DNA, AP.JP
Assunto(s):Reparo do DNA

Resumo

As Rho GTPases constituem uma família distinta dentro da superfamília das pequenas GTPases relacionadas a Ras e são encontradas em todas as células eucarióticas; em mamíferos, vinte e dois genes foram descritos codificando estas GTPases. Como outras, elas agem como chaves moleculares de liga-desliga ciclando entre um estado ativo ligado a GTP e um estado inativo ligado a GDP, e sua atividade é controlada por outras enzimas, as GEFs, GAPs e GDIs. Mais de 50 efetores já foram identificados para Rho, Rac, e Cdc42, incluindo serina/treonina quinases, tirosine quinases, lipídeo quinases, lipases, oxidases e proteínas adaptadoras.Proteínas Rho regulam muitas atividades celulares além de citoesqueleto e adesão, tais como polaridade, endocitose, tráfego vesicular, progressão através do ciclo, diferenciação, oncogênese, transcrição gênica e morte celular. Recentemente, algumas destas enzimas foram mostradas mediar alguma forma de instabilidade genômica, como senescência (RhoA), bloqeuio do ciclo celular, bloqueio de citocinese, etc. em algumas células tumorais de camundongo e também reparo de DNA lesado por radiação ultravioleta em querátinócitos humanos (RhoE), bem como por outros agentes genotóxicos (Wang et al, 2007; Ongusaha et al, 2006; Boswell et al, 2007). Muito ainda precisa ser investigado principalmente pela dinâmica rápida do tráfego citoplasma-núcleo de proteínas requerido pelas maquinarias de reparo, logo após a lesão do DNA por diferentes tipos de agentes estressores (Tembe & Henderson, 2007).De acordo com estas informações, este projeto visa investigar a participação de RhoA/Rac1/Cdc42 nos mecanismos de reparo de DNA após lesão promovida por radiação luz UVA, B e C, em linhagens celulares humanas transformadas. A abordagem da hipótese levantada envolverá: 1º) uma etapa teórica, onde o aluno investigará proteínas participantes das maquinarias de reparo de DNA e suas prováveis interações com as três GTPases; 2º) uma etapa experimental, envolvendo cultura de células humanas, promoção de estresse genotóxico com diferentes UVs e investigação da expressão e atividade de Rho GTPases com uso da tecnologia convencional do DNA recombinante e técnicas bioquímicas clássicas.