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Produção de leptina recombinante bovina em levedura Pichia pastoris e avaliação da atividade biológica.

Processo: 11/02206-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de junho de 2011
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2014
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Zootecnia - Produção Animal
Pesquisador responsável:Luis Felipe Prada e Silva
Beneficiário:Marina Vieira de Carvalho
Instituição-sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Novilhas   Leptina   Controle hormonal   Nutrição animal   Puberdade

Resumo

A nutrição possui claro efeito sobre o desenvolvimento reprodutivo de bovinos, sendo a leptina indicada como possível elo entre nutrição e reprodução, sinalizando a condição corporal ao hipotálamo e exercendo efeito permissivo à obtenção da puberdade. Objetiva-se com este trabalho clonar a região codificadora da leptina bovina, produzir a proteína recombinante em levedura Pischia pastoris e avaliar sua atividade biológica. A região codificante da leptina bovina será obtida através da amplificação por PCR de cDNA transcrito a partir de RNA extraído de amostras de tecido adiposo de novilhas Nelore. O gene será clonado em vetor de expressão e este inserido por eletroporação em bactéria Echerichia coli TOP10TM. Após seleção das colônias, os plasmídios serão isolados e seqüenciados para confirmação de que o enxerto está alinhado com a sequência sinalizadora de secreção. Cepas de P. pastoris serão transformadas por eletroporação para secreção de leptina no meio de cultura, sendo a leptina purificada por três fases de cromatografia, dializada e liofilizada. Será realizado, então, um ensaio in vitro em células BAF/3 1442-Cl4 leptina-sensíveis, transfectadas com o receptor de leptina humano, avaliando a proliferação dessa linhagem de células em resposta à presença da leptina produzida.

Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
CARVALHO, Marina Vieira de. Produção de leptina recombinante bovina em leveduras Pichia pastoris e avaliação da atividade biológica. 2014. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Pirassununga.

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