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Fingerprinting por MALDI-TOF e ESI-MS para identificação de bactérias em meios de cultura de embriões e sêmen visando a excelência sanitária da produção in vitro de embriões bovinos

Processo: 11/06191-7
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de setembro de 2011
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2015
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:Marcos Nogueira Eberlin
Beneficiário:Alessandra Tata
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):13/15575-9 - Procura e mapeamento de quorum sensing em fungos por espectrometria de massas em condições ambientes: determinação do perfil químico e localização de moléculas envolvidas em biocontrole entre agentes fúngicos e diferentes patógenos, BE.EP.PD
Assunto(s):Bovinos   Controle sanitário   Fertilização in vitro

Resumo

A qualidade da carne brasileira, a qual é reconhecida mundialmente, é o resultado da seleção genética na raça Nelore, naturalmente mais resistente à alta temperatura do clima tropical, à doenças e diversos parasitas, comparando-se às raças taurinas. Entretanto, o Brasil não é líder em ciência e desenvolvimento de novas técnicas em biotecnologias da reprodução bovina. Recentemente, um dos revisores de nossos artigos científicos comentou que nosso País "não pode ser considerado líder em produção in vitro de embriões somente pelo fato de produzi-los em maior quantidade". Dessa forma, precisamos reconhecer que os investimentos em pesquisas e inovação são de grande necessidade as biotecnologias como a fertilização in vitro (FIV) e transferência nuclear (TN). A certificação sanitária de embriões representa um grande desafio para o comércio de embriões de disseminação da alta qualidade de genética mundial por meio de embriões produzidos por FIV e TN. Dessa forma, empresas dedicadas à biotecnologia de embriões bovinos devem incorporar procedimentos sanitários em sua rotina visando a exportação de embriões. Também há necessidade de um diagnóstico sanitário da produção in vitro (PIV) de embriões bovinos, ou seja, um estudo epidemiológico visando rastrear e evitar a contaminação do meio de cultura com bactérias presentes no ambiente das fazendas e por sêmen congelado. Uma vez que a produção in vitro (PIV) de embriões bovinos representa uma percentagem considerável do número total de embriões bovinos produzidos no Brasil e há necessidade de metodologias de identificação de presença de microrganismos contaminantes do processo de PIV, o objetivo deste projeto interdisciplinar e colaborativo é propor a utilização de métodos reconhecidamente práticos e eficazes por espectrometria de massas (MS) para a identificação rápida de bactérias e estudo epidemiológico por meio do perfil de proteínas conservadas ou por seus metabólitos presentes em meios de cultura e amostras de sêmen, visando o rastreamento de fontes contaminantes e introduzindo uma nova ferramenta de controle de contaminação bacteriana em PIV. O delineamento experimental inclui a identificação de microrganismos contaminantes de meios de cultura e amostras de sêmen provenientes da Empresa In Vitro Brasil Ltda, localizada na cidade de Mogi Mirim-SP. Serão utilizadas duas técinas de MS: ionização por dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-TOF), combinada com um software contendo uma base de dados bacteriana (Biotyper, Bruker Daltonics, EUA), e a caracterização química de metabólitos por MS com fonte de ionização por electrospray (ESI-MS) de bactérias em busca de biomarcadores capazes de indicar de crescimento bacteriano em fase inicial. Para um número representativo de amostras, será realizada a identificação microbiológica clássica para comparação com os resultados de MALDI-TOF e ESI-MS. A proximidade da Empresa In Vitro Brasil Ltda e UNICAMP (55Km), bem como a interdisciplinaridade e aplicabilidade deste projeto deverão resultar na introdução de estratégias inovadoras e relevantes para o controle sanitário do PIV em bovinos, assim como publicações de impacto científico na área de biotecnologia de embriões. (AU)

Publicações científicas (12)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
ANNES, KELLY; SUDANO, MATEUS JOSE; BELAZ, KATIA ROBERTA A.; TATA, ALESSANDRA; SANTOS, VANESSA GONCALVES; DA FONSECA JUNIOR, ALDCEJAM MARTINS; DOS SANTOS, ERIKA CRISTINA; EBERLIN, MARCOS NOGUEIRA; MILAZZOTTO, MARCELLA PECORA. Lipid characterization of in vitro-produced bovine embryos with distinct kinetics of development. ZYGOTE, v. 27, n. 6, p. 413-422, DEC 2019. Citações Web of Science: 0.
GARCIA, N. L.; RODRIGUES-MOTTA, M.; BELAZ, K. R. A.; TATA, A.; FRANCA, M. R.; BINELLI, M.; EBERLIN, M. N. An EM-type approach for classification of bivariate MALDI-MS data and identification of high fertility markers. ENVIRONMETRICS, v. 30, n. 3 MAY 2019. Citações Web of Science: 0.
PITANGUI-MOLINA, CAROLINE P.; VIREQUEA, ALESSANDRA A.; TATA, ALESSANDRA; BELAZ, KATIA ROBERTA A.; SANTOS, VANESSA G.; FERREIRA, CHRISTINA R.; EBERLIN, MARCOS N.; SILVA-DE-SA, MARCOS FELIPE; FERRIANIA, RUI A.; ROSA-E-SILVA, ANA CAROLINA J. S. Effect of soybean phosphatidylcholine on lipid profile of bovine oocytes matured in vitro. Chemistry and Physics of Lipids, v. 204, p. 76-84, APR 2017. Citações Web of Science: 2.
DOS SANTOS, FABIO NEVES; TATA, ALESSANDRA; ANACLETO BELAZ, KATIA ROBERTA; ARGOLO MAGALHAES, DILZE MARIA; MARTINS NEWMAN LUZ, EDNA DORA; EBERLIN, MARCOS NOGUEIRA. Major phytopathogens and strains from cocoa (Theobroma cacao L.) are differentiated by MALDI-MS lipid and/or peptide/protein profiles. ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY, v. 409, n. 7, p. 1765-1777, MAR 2017. Citações Web of Science: 2.
BELAZ, KATIA ROBERTA A.; TATA, ALESSANDRA; FRANCA, MOANA R.; SANTOS DA SILVA, MARESSA I.; VENDRAMINI, PEDRO HENRIQUE; FERNANDES, ANNA MARIA A. P.; D'ALEXANDRI, FABIO L.; EBERLIN, MARCOS N.; BINELLI, MARIO. Phospholipid Profile and Distribution in the Receptive Oviduct and Uterus During Early Diestrus in Cattle. BIOLOGY OF REPRODUCTION, v. 95, n. 6 DEC 1 2016. Citações Web of Science: 7.
SUDANO, MATEUS J.; RASCADO, TATIANA D. S.; TATA, ALESSANDRA; BELAZ, KATIA R. A.; SANTOS, VANESSA G.; VALENTE, RONIELE S.; MESQUITA, FERNANDO S.; FERREIRA, CHRISTINA R.; ARAUJO, JOAO P.; EBERLIN, MARCOS N.; LANDIM-ALVARENGA, FERNANDA D. C. Lipidome signatures in early bovine embryo development. Theriogenology, v. 86, n. 2, p. 472-484, JUL 15 2016. Citações Web of Science: 15.
BATAGLION, GIOVANA A.; MARTINS FERREIRA SOUZA, GUSTAVO HENRIQUE; HEERDT, GABRIEL; MORGON, NELSON H.; LISBOA DUTRA, JOSE DIOGO; FREIRE, RICARDO OLIVEIRA; EBERLIN, MARCOS N.; TATA, ALESSANDRA. Separation of glycosidic catiomers by TWIM-MS using CO2 as a drift gas. Journal of Mass Spectrometry, v. 50, n. 2, p. 336-343, FEB 2015. Citações Web of Science: 11.
TATA, ALESSANDRA; MONTEMURRO, CHIARA; PORCARI, ANDREIA M.; SILVA, KAMILA C.; LOPES DE FARIA, JOSE B.; EBERLIN, MARCOS N. Spatial distribution of theobromine - a low MW drug - in tissues via matrix-free NALDI-MS imaging. DRUG TESTING AND ANALYSIS, v. 6, n. 9, p. 949-952, SEP 2014. Citações Web of Science: 7.
PORCARI, ANDREIA M.; FERNANDES, GABRIEL D.; BELAZ, KATIA ROBERTA A.; SCHWAB, NICOLAS V.; SANTOS, VANESSA G.; ALBERICI, ROSANA M.; GROMOVA, VARVARA A.; EBERLIN, MARCOS N.; LEBEDEV, ALBERT T.; TATA, ALESSANDRA. High throughput MS techniques for caviar lipidomics. ANALYTICAL METHODS, v. 6, n. 8, p. 2436-2443, 2014. Citações Web of Science: 15.
ZAMPIERI, DAVILA; SANTOS, VANESSA G.; BRAGA, PATRICIA A. C.; FERREIRA, CHRISTINA R.; BALLOTTIN, DANIELA; TASIC, LJUBICA; BASSO, ANDREA C.; SANCHES, BRUNO V.; PONTES, JOSE H. F.; DA SILVA, BARBARA PEREIRA; GARBOGGINI, FABIANA FANTINATTI; EBERLIN, MARCOS N.; TATA, ALESSANDRA. Microorganisms in cryopreserved semen and culture media used in the in vitro production (IVP) of bovine embryos identified by matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry (MALDI-MS). Theriogenology, v. 80, n. 4, p. 337-345, SEP 1 2013. Citações Web of Science: 3.
TATA, ALESSANDRA; SUDANO, MATEUS J.; SANTOS, VANESSA G.; LANDIM-ALVARENGA, FERNANDA D. C.; FERREIRA, CHRISTINA R.; EBERLIN, MARCOS N. Optimal single-embryo mass spectrometry fingerprinting. Journal of Mass Spectrometry, v. 48, n. 7, p. 844-849, JUL 2013. Citações Web of Science: 25.
SUDANO, MATEUS J.; SANTOS, VANESSA G.; TATA, ALESSANDRA; FERREIRA, CHRISTINA R.; PASCHOAL, DANIELA M.; MACHADO, RUI; BURATINI, JOSE; EBERLIN, MARCOS N.; LANDIM-ALVARENGA, FERNANDA D. C. Phosphatidylcholine and Sphingomyelin Profiles Vary in Bos taurus indicus and Bos taurus taurus In Vitro- and In Vivo-Produced Blastocysts. BIOLOGY OF REPRODUCTION, v. 87, n. 6 DEC 2012. Citações Web of Science: 56.

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