| Processo: | 11/13500-6 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 01 de outubro de 2011 |
| Data de Término da vigência: | 30 de setembro de 2015 |
| Área de conhecimento: | Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular |
| Pesquisador responsável: | Marcos Antonio de Oliveira |
| Beneficiário: | Carlos Alexandre Breyer |
| Instituição Sede: | Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus Experimental do Litoral Paulista. São Vicente , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Estresse oxidativo Biologia estrutural Peroxirredoxinas |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Estresse oxidativo | peroxirredoxinas | Biologia Molecular Estrutural |
Resumo Peroxirredoxinas (Prx) são proteínas antioxidantes capazes de decompor uma grande variedade de hidroperóxidos e tem se destacado devido sua eficiência catalítica, alta abundância e distribuição nos diversos compartimentos celulares. As Prx são capazes de reduzir seus substratos utilizando um resíduo de cisteína altamente reativa localizada em seu sítio ativo, denominada de cisteína peroxidásica (CP-SH), a qual no processo de decomposição de peróxidos é oxidada a cisteína ácido sulfênico (CP-SOH). Em Saccharomyces cerevisiae, há duas isoformas citosólicas de Prx (Tsa1 e Tsa2), que possuem grande semelhança (86% de identidade e 96% de similaridade). Em adição à atividade peroxidásica, já foi demonstrado que as enzimas Tsa1 e Tsa2 possuem atividade de chaperona; entretanto, a concentração intracelular dessas proteínas varia significativamente. Enquanto Tsa1 apresenta ~378000 moléculas por célula, Tsa2 possui somente 4800 na fase log de crescimento. Desta forma, tem-se postulado que apesar da grande semelhança, Tsa1 estaria envolvida principalmente na defesa celular em reposta a insultos oxidativos ou térmicos, ao passo que Tsa2 teria um maior envolvimento na transdução de sinal, em eventos como crescimento e apoptose. Já foi demonstrado que ambas as enzimas podem ser reduzidas pelas tiorredoxinas citosólicas (Trx1 e Trx2). Assim como as Prx citosólicas, Trx1 e Trx2 compartilham elevada semelhança nas suas estruturas primárias (78% de identidade e 89% de similaridade) e muitas vezes são consideradas proteínas redundantes. Entretanto, nenhum estudo até o momento atentou para verificar se as taxas de redução Tsa1 e Tsa2 são equivalentes entre si quando se utiliza Trx1 ou Trx2. Recentemente foi determinada a estrutura de Tsa1 e a análise de sua estrutura revela que 27 dos 28 aminoácidos que a diferem de Tsa2 se encontram na superfície da molécula, o que sugere interações particulares com as Trx citosólicas. Este projeto tem como objetivos efetuar análises sistemáticas das relações moleculares de Tsa1 e Tsa2 com Trx1 e Trx2, o qual deve resultar em um maior entendimento nos processos de redução/superoxidação de Tsa1 e Tsa2 e, consequentemente, nos processos celulares em que estas proteínas participam. Para tanto, pretendemos determinar a estrutura de Tsa2 no estado reduzido e oxidado em dissulfeto visando o entendimento em detalhe de suas diferenças com Tsa1 e relações moleculares com seus substratos. Também será efetuada a avaliação comparativa das taxas de redução de Tsa1 e Tsa2 por Trx1 ou Trx2, por meio do ensaio de oxidação do NADPH. As taxas de redução influenciam decisivamente na superoxidação, oligomerização e função de chaperona de Tsa1 e Tsa2, estas serão avaliadas por meio de western blot (WB) utilizando anticorpos específicos para formas superoxidadas (in vitro e in vivo), cromatografia de exclusão molecular (SEC) e espalhamento dinâmico de luz (DLS). Para maior aprofundamento na investigação, serão realizadas mutações sítio dirigidas individuais/combinatórias de aminoácidos de Tsa2 presentes na superfície de interação Tsa/Trx. As mutações substituirão aminoácidos em Tsa2 por seus correspondentes que ocupam a mesma posição em Tsa1 (Tsa2(S45T), Tsa2(K97N) e Tsa2(D150N). | |
| Matéria(s) publicada(s) na Agência FAPESP sobre a bolsa: | |
| Mais itensMenos itens | |
| TITULO | |
| Matéria(s) publicada(s) em Outras Mídias ( ): | |
| Mais itensMenos itens | |
| VEICULO: TITULO (DATA) | |
| VEICULO: TITULO (DATA) | |