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Expressão gênica e proteica de receptores Toll-like-1, -2, -4 e -6 em neutrófilos e monócitos maternos e avaliação da ativação dessas células em gestações normais e complicadas por RPM-PT ou TPP na presença ou não de corioamnionite histológica

Processo: 11/14195-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de novembro de 2011
Vigência (Término): 28 de fevereiro de 2015
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
Pesquisador responsável:Márcia Guimarães da Silva
Beneficiário:Natália Prearo Moço
Instituição-sede: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Assunto(s):Corioamnionite   Recém-nascido prematuro   Reação em cadeia da polimerase em tempo real   Citometria de fluxo   ELISA

Resumo

Introdução: Receptores Toll-like (TLRs) constituem parte importante do sistema imune inato e são expressos em vários tecidos humanos. Poucos trabalhos enfocam o papel dos TLRs na gestação e dados escassos estão disponíveis em relação à expressão desses receptores em neutrófilos e monócitos maternos de gestações complicadas por rotura prematura de membranas pré-termo (RPM-PT) e trabalho de parto pré-termo (TPP). Objetivo: Traçar o perfil de expressão gênica e protéica de TLR-1, -2, -4 e -6 em neutrófilos e monócitos do sangue periférico materno, bem como avaliar o estado de ativação dessas células, ao longo da gestação normal e em gestações complicadas por RPM-PT e TPP, na presença ou não de corioamnionite histológica. Pacientes e métodos: Será realizado estudo longitudinal que incluirá 15 medidas da expressão dos TLRs em neutrófilos maternos por semana gestacional, a partir da 5ª semana de gestação, incluindo o momento do parto. O grupo controle será constituído por 50 mulheres não-gestantes, as quais deverão possuir idade e paridade semelhantes ao grupo estudo. Paralelamente, será realizado um estudo transversal no qual serão incluídas 45 gestantes que apresentarem RPM-PT e 45 gestantes em TPP com bolsa íntegra, na presença ou não de corioamnionite histológica. O grupo controle será constituído por gestantes de termo sem complicações obstétricas, pertencentes ao do estudo longitudinal. Serão coletados 35 mL de sangue periférico, sendo 30 mL para isolamento e cultura de neutrófilos e monócitos e 5 mL para extração de RNA total. No momento da resolução da gestação, logo após a dequitação, fragmentos das membranas corioamnióticas serão fixados, desidratados em álcool, diafanizados em xilol e a seguir incluídos em blocos de parafina. Cortes de 5 mm serão corados pelo método Hematoxilina-Eosina (HE). A detecção de RNA mensageiro de TLR-1,-2,-4 e -6 em neutrófilos maternos será realizada pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real e a detecção protéica de TLR2 e TLR4 nos neutrófilos será avaliada por citometria de fluxo e a pesquisa de corioamnionite será realizada por análise histopatológica. A avaliação da ativação dos neutrófilos e monócitos estimulados por PAMPs específicos para os TLRs de interesse será feita pela dosagem das citocinas IL-1, IL-6, IL-8 e TNF-a pela técnica de ELISA, além da dosagem da produção de peróxido de hidrogênio. A análise estatística será realizada respeitando os pressupostos determinados pelos resultados. O nível de significância adotado será de 5% e o software empregado será o SigmaStat 9.0 (Jandel Corporation).

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
MOCO, NATALIA PREARO; CAMARGO BATISTA, RENATA APARECIDA; MARTIN, LAURA FERNANDES; DE OLIVEIRA, LEANDRO GUSTAVO; GARCIA DE LIMA PARADA, CRISTINA MARIA; DIAS-MELICIO, LUCIANE ALARCAO; GOLIM, MARJORIE DE ASSIS; DA SILVA, MARCIA GUIMARAES. Toll-Like Receptor-2 and-4 Expression by Maternal Neutrophils in Preterm Labor. GYNECOLOGIC AND OBSTETRIC INVESTIGATION, v. 83, n. 1, p. 1-8, 2018. Citações Web of Science: 1.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
MOÇO, Natália Prearo. Expressão gênica e protéica de receptores Toll-like em células do sangue periférico materno de gestações normais e complicadas por prematuridade. 2015. 75 f. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Faculdade de Medicina..

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