Expressão gênica e protéica de receptores Toll-like-1, -2, -4 e -6 em neutrófilos ...
- Auxílios pontuais (curta duração)
| Processo: | 11/14195-2 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Vigência (Início): | 01 de novembro de 2011 |
| Vigência (Término): | 28 de fevereiro de 2015 |
| Área do conhecimento: | Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil |
| Pesquisador responsável: | Márcia Guimarães da Silva |
| Beneficiário: | Natália Prearo Moço |
| Instituição-sede: | Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Corioamnionite Recém-nascido prematuro Reação em cadeia da polimerase em tempo real Citometria de fluxo ELISA |
Resumo Introdução: Receptores Toll-like (TLRs) constituem parte importante do sistema imune inato e são expressos em vários tecidos humanos. Poucos trabalhos enfocam o papel dos TLRs na gestação e dados escassos estão disponíveis em relação à expressão desses receptores em neutrófilos e monócitos maternos de gestações complicadas por rotura prematura de membranas pré-termo (RPM-PT) e trabalho de parto pré-termo (TPP). Objetivo: Traçar o perfil de expressão gênica e protéica de TLR-1, -2, -4 e -6 em neutrófilos e monócitos do sangue periférico materno, bem como avaliar o estado de ativação dessas células, ao longo da gestação normal e em gestações complicadas por RPM-PT e TPP, na presença ou não de corioamnionite histológica. Pacientes e métodos: Será realizado estudo longitudinal que incluirá 15 medidas da expressão dos TLRs em neutrófilos maternos por semana gestacional, a partir da 5ª semana de gestação, incluindo o momento do parto. O grupo controle será constituído por 50 mulheres não-gestantes, as quais deverão possuir idade e paridade semelhantes ao grupo estudo. Paralelamente, será realizado um estudo transversal no qual serão incluídas 45 gestantes que apresentarem RPM-PT e 45 gestantes em TPP com bolsa íntegra, na presença ou não de corioamnionite histológica. O grupo controle será constituído por gestantes de termo sem complicações obstétricas, pertencentes ao do estudo longitudinal. Serão coletados 35 mL de sangue periférico, sendo 30 mL para isolamento e cultura de neutrófilos e monócitos e 5 mL para extração de RNA total. No momento da resolução da gestação, logo após a dequitação, fragmentos das membranas corioamnióticas serão fixados, desidratados em álcool, diafanizados em xilol e a seguir incluídos em blocos de parafina. Cortes de 5 mm serão corados pelo método Hematoxilina-Eosina (HE). A detecção de RNA mensageiro de TLR-1,-2,-4 e -6 em neutrófilos maternos será realizada pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real e a detecção protéica de TLR2 e TLR4 nos neutrófilos será avaliada por citometria de fluxo e a pesquisa de corioamnionite será realizada por análise histopatológica. A avaliação da ativação dos neutrófilos e monócitos estimulados por PAMPs específicos para os TLRs de interesse será feita pela dosagem das citocinas IL-1, IL-6, IL-8 e TNF-a pela técnica de ELISA, além da dosagem da produção de peróxido de hidrogênio. A análise estatística será realizada respeitando os pressupostos determinados pelos resultados. O nível de significância adotado será de 5% e o software empregado será o SigmaStat 9.0 (Jandel Corporation). | |