Extração de fragmentos de anticorpos monoclonais scFv por sistemas micelares de duas fases aquosas

• Processo: 11/20521-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2012
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2014
• Área de conhecimento: Engenharias - Engenharia Química - Processos Industriais de Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Adalberto Pessoa Junior
• Beneficiário: Luciana Pellegrini Malpiedi
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Engenharia bioquímica Extração líquido-líquido Processos bioquímicos Anticorpos monoclonais Processamento downstream Sistema de duas fases aquosas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: anticorpos monoclonais | Downstream Processing | engenharia bioquímica | Extração Líquido-Líquido | purificação de biomoléculas | sistemas de duas fases aquosas | Processos Bioquímicos

Resumo

Importante porcentagem (70-80%) nos custos de obtenção de produtos biotecnológicos corresponde às etapas de separação e purificação sendo, portanto, necessária otimização das metodologias a serem empregadas de forma a assegurarem boa relação custo-benefício do produto de interesse. Os sistemas micelares de duas fases aquosas apresentam-se como uma tecnologia de biosseparação apropriada, visto que proporcionam meios adequados para a integridade das macromoléculas e permitem regular as condições experimentais com possibilidade de extração seletiva. Atualmente, muitos processos imuno-inflamatórios têm sido associados às doenças atero-coronarianas, apontando para envolvimento benéfico de anticorpos e seus fragmentos dirigidos contra lipoproteínas de baixa densidade (LDL) oxidadas. Com isto surge a necessidade de estudos de novos métodos de obtenção utilizando microrganismos como modelo de expressão de proteínas, com destaque para Pichia pastoris, uma levedura de fácil manipulação, com capacidade de realização de modificações pós-translacionais, crescimento rápido e bons rendimentos. Diante disto, este projeto tem a finalidade de estudar a purificação de fragmentos de anticorpos monoclonais SCFv anti-LDL oxidada produzidos por cultivo de P. pastoris geneticamente modificada por extração líquido-líquido em sistemas micelares de duas fases aquosas formados por Triton X-114/ Tampão McIlvaine. Estudar-se-á o efeito dos componentes químicos dos sistemas sobre a integridade da macromolécula e também serão analisados os efeitos de diferentes variáveis como pH, temperatura, concentração de surfactante, concentração de sais e a presença de moléculas ligantes sobre a partição e a recuperação do anticorpo scFv. Serão selecionadas as melhores condições experimentais e se aplicará um aumento de escala de até 1000 vezes em relação ao seu volume inicial para testar seu potencial de aplicação na indústria. (AU)

Publicações científicas

(5)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

LARIO, LUCIANA DANIELA; PELLEGRINI MALPIEDI, LUCIANA; BRANDAO PEREIRA, JORGE FERNANDO; SETTE, LARA DURAES; PESSOA-JUNIOR, ADALBERTO. Liquid-liquid extraction of protease from cold-adapted yeast Rhodotorula mucilaginosa L7 using biocompatible and biodegradable aqueous two-phase systems. SEPARATION SCIENCE AND TECHNOLOGY, v. 51, n. 1, p. 57-67, JAN 2 2016. (13/19486-0, 11/20521-0, 12/23726-4)

MALPIEDI, LUCIANA P.; NERLI, BIBIANA B.; ABDALLA, DULCINEIA S. P.; PESSOA, JR., ADALBERTO. Assessment of the effect of triton X-114 on the physicochemical properties of an antibody fragment. BIOTECHNOLOGY PROGRESS, v. 30, n. 3, p. 554-561, MAY-JUN 2014. (11/20521-0)

VICENTE, FILIPA A.; MALPIEDI, LUCIANA P.; E SILVA, FRANCISCA A.; PESSOA, JR., ADALBERTO; COUTINHO, JOAO A. P.; VENTURA, SONIA P. M.. Design of novel aqueous micellar two-phase systems using ionic liquids as co-surfactants for the selective extraction of (bio)molecules. Separation and Purification Technology, v. 135, p. 259-267, OCT 15 2014. (12/12022-6, 11/20521-0)

MALPIEDI, LUCIANA P.; NERLI, BIBIANA B.; ABDALA, DULCINEIA S. P.; PESSOA-FILHO, PEDRO DE ALCANTARA; PESSOA, JR., ADALBERTO. Aqueous micellar systems containing Triton X-114 and Pichia pastoris fermentation supernatant: A novel alternative for single chain-antibody fragment purification. Separation and Purification Technology, v. 132, p. 295-301, AUG 20 2014. (11/20521-0)

MALPIEDI, LUCIANA P.; NERLI, BIBIANA B.; TAQUEDA, MARIA E. S.; ABDALLA, DULCINEIA S. P.; PESSOA, JR., ADALBERTO. Optimized extraction of a single-chain variable fragment of antibody by using aqueous micellar two-phase systems. Protein Expression and Purification, v. 111, p. 53-60, JUL 2015. (11/20521-0)