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Obtenção e utilização de vetor viral SFV expressando GFP e RVGP

Processo: 11/15269-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de março de 2012
Vigência (Término): 31 de agosto de 2013
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Imunologia
Pesquisador responsável:Renato Mancini Astray
Beneficiário:Ana Lia Pradella Puglia
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Proteínas de fluorescência verde

Resumo

A utilização do Semliki Forest Virus (SFV) para fins de produção de proteínas recombinantes em células de mamíferos infectadas ou para fins terapêuticos e vacinais vem sendo cada vez mais estudada. A obtenção e utilização desse vetor viral requerem a execução de diversas etapas de biologia molecular e de cultivo de células. Com o objetivo de estabelecer e padronizar essas diferentes metodologias, utilizaremos um vetor capaz de expressar o gene da proteína verde fluorescente (GFP). O SFV-GFP, quando obtido por metodologia padronizada, será utilizado para desenvolver a RT-PCR quantitativa como método inovador para a titulação viral, por meio da correlação entre seus resultados e os resultados de infecção in vitro medidos por citometria de fluxo. Serão estabelecidos parâmetros para o estudo da melhor relação entre as quantidades de vírus / células (multiplicidade de infecção- moi) e quanto ao tempo e à temperatura de infecção mais adequados à expressão recombinante. Será determinada a relação entre título viral e a produção da proteína recombinante em condições padronizadas, comparando os vetores SFV-GFP e SFV carregando o gene da glicoproteína do vírus da raiva (RVGP), os (SFV-RVGP). Com o SFV-RVGP produzidos, caracterizados e quantificados pretendemos ainda estudar as diferenças da resposta imunológica em camundongos imunizados com este vetor viral onde a produção da RVGP ocorre in vivo, com a resposta em camundongos imunizados com a RVGP produzida in vitro em células de mamíferos.

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
PUGLIA, ANA L. P.; REZENDE, ALEXANDRE G.; JORGE, SORAIA A. C.; WAGNER, RENAUD; PEREIRA, CARLOS A.; ASTRAY, RENATO M. Quantitative RT-PCR for titration of replication-defective recombinant Semliki Forest virus. Journal of Virological Methods, v. 193, n. 2, p. 647-652, NOV 2013. Citações Web of Science: 8.

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