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Análise funcional e molecular do gene CG2943, o ortólogo do gene KIAA0090 em Drosophila melanogaster

Processo: 11/16666-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de março de 2012
Vigência (Término): 31 de março de 2013
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Enilza Maria Espreafico
Beneficiário:Carlos Antonio Couto Lima
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Neoplasias   Caracterização molecular   Biologia tumoral   Drosophila melanogaster

Resumo

O gene KIAA0090, localizado no cromossomo 1(1p36.13), codifica uma proteína altamente conservada cujas evidências sugerem sua participação em vias de resposta ao estresse. Dados preliminares obtidos em nosso laboratório demonstraram expressão elevada do gene KIAA0090 em linhagens metastáticas de melanoma. Em Drosophila melanogaster seu ortólogo está anotado sob o CG2943. Nossos experimentos mostraram que todos os animais homozigotos para uma inserção de elemento P (transposon) na extremidade 5'do gene apresentaram letalidade no estágio de pupa tardia. A análise morfológica durante a metamorfose indicou não haver defeitos anatômicos evidentes ou atrasos no desenvolvimento quando comparados aos animais controle. Em outro experimento esses indivíduos foram retirados mecanicamente do envoltório pupal no momento em que deveriam emergir, o que demonstrou que eles ainda estavam vivos, no entanto, apresentando sério defeitos de locomoção, o que impossibilitava que emergissem normalmente. Atualmente dispomos de uma linhagem trangênica de Drosophila contendo uma sequência de RNA de interferência específica para o CG2943. Pela utilização do sistema modular de expressão UAS-GAL4 se torna possível a expressão dirigida do RNA dupla fita em diferentes tipos celulares em estágios pré-determinados. A expressão dirigida do transgene em células musculares gerou letalidade pupal, o que torna-se interessante, já que reproduz o fenótipo observado anteriormente. Análises de RT-PCR em tempo real estão atualmente sendo conduzidas no intuito de avaliar o grau do silenciamento nesses animais. Pela utilização de Drosophila esperamos explorar molecularmente a função do gene CG2943, possibilitando a transferência dos conhecimentos adquiridos para a área de estudo do câncer humano.