Expressão, purificação e cristalização de um complexo de septinas

• Processo: 11/23302-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2012
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Joci Neuby Alves Macedo
• Beneficiário: João Victor de Souza Cunha
• Instituição Sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/14138-2 - Center for Structural Molecular Biotechnology, AP.CEPID
• Assunto(s): Doenças neurodegenerativas Expressão heteróloga Septinas Processos de crescimento celular Cristalografia de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: análises estruturais | Complexos Proteicos | Cristalografia de Proteínas | expressão heteróloga | septinas | Estudos estruturais de proteínas

Resumo

As septinas pertencem a família das GTPases e foram inicialmente identificadas em leveduras, mas possuem representantes em vários eucariotos, com exceção de plantas. Estruturalmente, as septinas são formadas basicamente por três regiões, um domínio N-terminal variável e rico em prolina, um domínio central GTPase e um domínio C-terminal predito coiled-coil. Atualmente 13 septinas humanas foram identificadas, classificadas em quatro grupos segundo similaridades de suas estruturas primárias no domínio C-terminal. Em humanos, há várias evidências da importância das septinas em processos celulares, além disso, tem sido observada a presença dessas proteínas em corpos de inclusões citoplasmáticas, relacionados a doenças neurodegenerativas (Parkinson e Alzheimer) e a alguns tipos de câncer. Um aspecto interessante das septinas, cujo mecanismo também é ainda pouco entendido, é que elas são capazes de se polimerizar para formar hetero-oligômeros, os quais se arranjam em filamentos altamente organizados. Neste contexto, esta proposta objetiva expandir o estudo de septinas, numa abordagem direcionada à estrutura de seus complexos. O alvo para os ensaios de cristalização e resolução estrutural será o complexo formado pelas septinas 5, 6 e 7. Este complexo foi escolhido baseado em resultados prévios de ensaios de interação das septinas via duplo-híbrido e por exibir uma única substituição no complexo canônico das septinas 2, 6 e 7. Os resultados deste trabalho contribuirão para o avanço no entendimento dos heterocomplexos de septinas e de como essas proteínas interagem entre si nesse arranjo. (AU)