Bioprospecção de toxinas animais com interesse biotecnológico a partir de ferramen...
- Auxílios pontuais (curta duração)
| Processo: | 11/12317-3 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Vigência (Início): | 01 de março de 2012 |
| Vigência (Término): | 30 de novembro de 2015 |
| Área do conhecimento: | Ciências da Saúde - Farmácia - Análise Toxicológica |
| Pesquisador responsável: | Eliane Candiani Arantes Braga |
| Beneficiário: | Fernanda Gobbi Amorim |
| Instituição-sede: | Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil |
| Bolsa(s) vinculada(s): | 13/26083-0 - Análise de modificações pós-traducionais de toxinas nativas e recombinantes da peçonha Tityus serrulatus por espectrometria de massas, BE.EP.DR |
| Assunto(s): | Transcriptoma Toxicologia Hialuronidase Tityus |
Resumo Atualmente, o interesse pelo estudo das características químicas e funcionais de toxinas isoladas de peçonhas animais não é devido somente à sua relevância no envenenamento, mas também à sua potencial utilização como fármacos para o tratamento de uma diversidade de doenças. Com o advento das técnicas "ômicas", como o transcriptoma, foi possível não só a caracterização dessas toxinas, mas também a identificação de novos componentes com potencial biotecnológico. Entretanto, apesar da diversidade de ações fisiológicas e do potencial farmacológico apresentado pelas toxinas animais, há uma discrepância entre o enorme número de proteínas isoladas e caracterizadas e a quantidade de proteínas que vêm a se tornar efetivamente um medicamento, o que se deve às limitações na obtenção de toxinas em quantidades suficientes para uma caracterização estrutural e funcional detalhada das mesmas. Desta forma, a expressão heteróloga de proteínas consiste em uma alternativa para a obtenção de moléculas, tanto em escala laboratorial para o estudo de suas atividades enzimáticas e funcionais, quando em escala industrial, visando à produção de fármacos em larga escala. Diante desse panorama, o presente projeto apresenta dois objetivos principais, sendo eles: a construção da biblioteca de cDNA da glândula de peçonha de Tityus serrulatus para a identificação de toxinas com potencial biotecnológico; e a clonagem e expressão em sistema heterólogo da hialuronidase e/ou novas toxinas obtidas a partir do transcriptoma, além da sua caracterização estrutural e funcional visando a validação do processo de expressão heteróloga. Para tanto, serão aplicadas técnicas de biologia molecular para produção do transcriptoma a partir da glândula de peçonha e as sequências de interesse serão clonadas em vetor de expressão para a realização da expressão em sistema heterólogo. Para validação do processo de expressão, as formas nativas obtidas a partir da peçonha, como a hialuronidase, serão purificadas por meios cromatográficos e submetidas a caracterização estrutural com espectrometria de massas, sequenciamento amino-terminal, eletroforese, entre outros. Além disso, as formas nativas e recombinantes serão caracterizadas quanto aos parâmetros bioquímicos (cinética enzimática, determinação de ponto isoelétrico e atividade sobre diferentes substratos) e funcionais (ensaios in vivo). Portanto, esse projeto será capaz de validar o processo de expressão heteróloga no qual poderá fornecer toxinas de difícil purificação da peçonha e/ou novas toxinas com alto potencial biotecnológico. (AU) | |