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Determinação dos sítios de clivagens de alvos de ADAM-17 recombinante em cultura de células humanas

Processo: 11/22421-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de fevereiro de 2012
Vigência (Término): 30 de abril de 2015
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina
Pesquisador responsável:Adriana Franco Paes Leme
Beneficiário:Rebeca Kawahara Sakuma
Instituição-sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia, Inovações e Comunicações (Brasil). Campinas , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:10/19278-0 - Estudo da regulação de ADAMs em câncer oral, AP.JP
Bolsa(s) vinculada(s):13/21603-5 - Quantificação de biomarcadores de câncer por proteômica baseada em alvos, BE.EP.DD
Assunto(s):Proteômica   Clivagem do RNA   Proteínas ADAM   Cultura de células   Espectrometria de massas

Resumo

Os objetivos desse estudo serão buscar novos alvos para ADAM-17 e determinar os sítios de clivagens específicos dessa proteinase utilizando abordagens de Biologia Molecular e proteômica/espectrometria de massas. Para isso, as sequências de cDNA correspondentes aos domínios metaloproteinase, tipo-disintegrina e rico em cisteínas da ADAM-17 e tipo epidermal serão amplificadas pela reação em cadeia com polimerase e subclonadas nos vetores de expressão. Após expressão e purificação, a proteinase recombinante será incubada com cultura de células humanas não tumorigênicas (controle normal) e tumorigênicas, respectivamente HaCaT e SCC-9. As proteínas clivadas ou liberadas da superfície das células HaCaT e SCC-9 serão digeridas com tripsina e os sítios de clivagens serão identificados por espectrometria de massas. As estratégias utilizadas nesse estudo podem identificar novos alvos celulares e de matriz extracelular da ADAM-17 em células tumorigênicas e não tumorigênicas e elucidar os sítios de preferência de uma proteinase intrínsecos ao seu mecanismo de ação, como também é uma das estratégias para o desenho de substratos peptídicos e inibidores. (AU)

Publicações científicas (6)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
KAWAHARA, REBECA; GRANATO, DANIELA CAMPOS; YOKOO, SAMI; DOMINGUES, ROMENIA RAMOS; TRINDADE, DANIEL MARAGNO; PAES LEME, ADRIANA FRANCO. Mass spectrometry-based proteomics revealed Glypican-1 as a novel ADAM17 substrate. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 151, n. SI, p. 53-65, JAN 16 2017. Citações Web of Science: 3.
FLORES, ISADORA L.; KAWAHARA, REBECA; MIGUEL, MARCIA C. C.; GRANATO, DANIELA C.; DOMINGUES, ROMENIA R.; MACEDO, CAROLINA C. S.; CARNIELLI, CAROLINA M.; YOKOO, SAMI; RODRIGUES, PRISCILA C.; MONTEIRO, BARBARA V. B.; OLIVEIRA, CARINE E.; SALMON, CRISTIANE R.; NOCITI, FRANCISCO H.; LOPES, MARCIO A.; SANTOS-SILVA, ALAN; WINCK, FLAVIA V.; COLETTA, RICARDO D.; PAES LEME, ADRIANA F. EEF1D modulates proliferation and epithelial-mesenchymal transition in oral squamous cell carcinoma. Clinical Science, v. 130, n. 10, p. 785-799, MAY 1 2016. Citações Web of Science: 12.
KAWAHARA, REBECA; MEIRELLES, GABRIELA V.; HEBERLE, HENRY; DOMINGUES, ROMENIA R.; GRANATO, DANIELA C.; YOKOO, SAMI; CANEVAROLO, RAFAEL R.; WINCK, FLAVIAV.; RIBEIRO, ANA CAROLINA P.; BRANDAO, THAIS BIANCA; FILGUEIRAS, PAULO R.; CRUZ, KAREN S. P.; BARBUTO, JOSE ALEXANDRE; POPPI, RONEI J.; MINGHIM, ROSANE; TELLES, GUILHERME P.; FONSECA, FELIPE PAIVA; FOX, JAY W.; SANTOS-SILVA, ALAN R.; COLETTA, RICARDO D.; SHERMAN, NICHOLAS E.; PAES LEME, ADRIANA F. Integrative analysis to select cancer candidate biomarkers to targeted validation. ONCOTARGET, v. 6, n. 41, p. 43635-43652, DEC 22 2015. Citações Web of Science: 5.
KAWAHARA, REBECA; GRANATO, DANIELA C.; CARNIELLI, CAROLINA M.; CERVIGNE, NILVA K.; OLIVERIA, CARINE E.; MARTINEZ, CESAR A. R.; YOKOO, SAMI; FONSECA, FELIPE P.; LOPES, MARCIO; SANTOS-SILVA, ALAN R.; GRANER, EDGARD; COLETTA, RICARDO D.; PAES LEME, ADRIANA FRANCO. Agrin and Perlecan Mediate Tumorigenic Processes in Oral Squamous Cell Carcinoma. PLoS One, v. 9, n. 12 DEC 15 2014. Citações Web of Science: 23.
GRANATO, DANIELA C.; ZANETTI, MARIANA R.; KAWAHARA, REBECA; YOKOO, SAMI; DOMINGUES, ROMENIA R.; ARAGAO, ANNELIZE Z.; AGOSTINI, MICHELLE; CARAZZOLLE, MARCELO F.; VIDAL, RAMON O.; FLORES, ISADORA L.; KORVALA, JOHANNA; CERVIGNE, NILVA K.; SILVA, ALAN R. S.; COLETTA, RICARDO D.; GRANER, EDGARD; SHERMAN, NICHOLAS E.; PAES LEME, ADRIANA F. Integrated Proteomics Identified Up-Regulated Focal Adhesion-Mediated Proteins in Human Squamous Cell Carcinoma in an Orthotopic Murine Model. PLoS One, v. 9, n. 5 MAY 23 2014. Citações Web of Science: 5.
KAWAHARA, REBECA; LIMA, RENATO NIYAMA; DOMINGUES, ROMENIA R.; PAULETTI, BIANCA ALVES; MEIRELLES, GABRIELA V.; ASSIS, MICHELLE; MIGLIORINI FIGUEIRA, ANA CAROLINA; PAES LEME, ADRIANA FRANCO. Deciphering the Role of the ADAM17-Dependent Secretome in Cell Signaling. JOURNAL OF PROTEOME RESEARCH, v. 13, n. 4, p. 2080-2093, APR 2014. Citações Web of Science: 20.

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