Determinação dos sítios de clivagens de alvos de ADAM-17 recombinante em cultura de células humanas

• Processo: 11/22421-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2012
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2015
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Adriana Franco Paes Leme
• Beneficiário: Rebeca Kawahara Sakuma
• Instituição Sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 10/19278-0 - Estudo da regulação de ADAMs em câncer oral, AP.JP
• Bolsa(s) vinculada(s): 13/21603-5 - Quantificação de biomarcadores de câncer por proteômica baseada em alvos, BE.EP.DD
• Assunto(s): Proteômica Clivagem do RNA Proteínas ADAM Cultura de células Espectrometria de massas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Espectrometria de massas | metaproteinases | proteômica | sítio de clivagem | Proteômica

Resumo

Os objetivos desse estudo serão buscar novos alvos para ADAM-17 e determinar os sítios de clivagens específicos dessa proteinase utilizando abordagens de Biologia Molecular e proteômica/espectrometria de massas. Para isso, as sequências de cDNA correspondentes aos domínios metaloproteinase, tipo-disintegrina e rico em cisteínas da ADAM-17 e tipo epidermal serão amplificadas pela reação em cadeia com polimerase e subclonadas nos vetores de expressão. Após expressão e purificação, a proteinase recombinante será incubada com cultura de células humanas não tumorigênicas (controle normal) e tumorigênicas, respectivamente HaCaT e SCC-9. As proteínas clivadas ou liberadas da superfície das células HaCaT e SCC-9 serão digeridas com tripsina e os sítios de clivagens serão identificados por espectrometria de massas. As estratégias utilizadas nesse estudo podem identificar novos alvos celulares e de matriz extracelular da ADAM-17 em células tumorigênicas e não tumorigênicas e elucidar os sítios de preferência de uma proteinase intrínsecos ao seu mecanismo de ação, como também é uma das estratégias para o desenho de substratos peptídicos e inibidores. (AU)

Publicações científicas

(7)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

KAWAHARA, REBECA; GRANATO, DANIELA CAMPOS; YOKOO, SAMI; DOMINGUES, ROMENIA RAMOS; TRINDADE, DANIEL MARAGNO; PAES LEME, ADRIANA FRANCO. Mass spectrometry-based proteomics revealed Glypican-1 as a novel ADAM17 substrate. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 151, n. SI, p. 53-65, JAN 16 2017. (11/22421-2, 09/54067-3, 10/19278-0)

KAWAHARA, REBECA; MEIRELLES, GABRIELA V.; HEBERLE, HENRY; DOMINGUES, ROMENIA R.; GRANATO, DANIELA C.; YOKOO, SAMI; CANEVAROLO, RAFAEL R.; WINCK, FLAVIAV.; RIBEIRO, ANA CAROLINA P.; BRANDAO, THAIS BIANCA; et al. Integrative analysis to select cancer candidate biomarkers to targeted validation. ONCOTARGET, v. 6, n. 41, p. 43635-43652, DEC 22 2015. (11/22421-2, 09/54067-3, 09/53839-2, 10/19278-0)

FLORES, ISADORA L.; KAWAHARA, REBECA; MIGUEL, MARCIA C. C.; GRANATO, DANIELA C.; DOMINGUES, ROMENIA R.; MACEDO, CAROLINA C. S.; CARNIELLI, CAROLINA M.; YOKOO, SAMI; RODRIGUES, PRISCILA C.; MONTEIRO, BARBARA V. B.; et al. EEF1D modulates proliferation and epithelial-mesenchymal transition in oral squamous cell carcinoma. Clinical Science, v. 130, n. 10, p. 785-799, MAY 1 2016. (11/22421-2, 09/53839-2, 09/54067-3, 13/01607-6, 10/19278-0)

KAWAHARA, REBECA; LIMA, RENATO NIYAMA; DOMINGUES, ROMENIA R.; PAULETTI, BIANCA ALVES; MEIRELLES, GABRIELA V.; ASSIS, MICHELLE; MIGLIORINI FIGUEIRA, ANA CAROLINA; PAES LEME, ADRIANA FRANCO. Deciphering the Role of the ADAM17-Dependent Secretome in Cell Signaling. JOURNAL OF PROTEOME RESEARCH, v. 13, n. 4, p. 2080-2093, APR 2014. (11/22421-2, 09/54067-3, 09/53839-2, 10/19278-0)

GRANATO, DANIELA C.; ZANETTI, MARIANA R.; KAWAHARA, REBECA; YOKOO, SAMI; DOMINGUES, ROMENIA R.; ARAGAO, ANNELIZE Z.; AGOSTINI, MICHELLE; CARAZZOLLE, MARCELO F.; VIDAL, RAMON O.; FLORES, ISADORA L.; et al. Integrated Proteomics Identified Up-Regulated Focal Adhesion-Mediated Proteins in Human Squamous Cell Carcinoma in an Orthotopic Murine Model. PLoS One, v. 9, n. 5, MAY 23 2014. (11/22421-2, 11/02267-9, 09/53839-2, 09/54067-3, 10/19278-0)

KAWAHARA, REBECA; GRANATO, DANIELA CAMPOS; YOKOO, SAMI; DOMINGUES, ROMENIA RAMOS; TRINDADE, DANIEL MARAGNO; PAES LEME, ADRIANA FRANCO. Mass spectrometry-based proteomics revealed Glypican-1 as a novel ADAM17 substrate. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 151, p. 13-pg., 2017-01-16. (09/54067-3, 11/22421-2, 10/19278-0)

KAWAHARA, REBECA; GRANATO, DANIELA C.; CARNIELLI, CAROLINA M.; CERVIGNE, NILVA K.; OLIVERIA, CARINE E.; MARTINEZ, CESAR A. R.; YOKOO, SAMI; FONSECA, FELIPE P.; LOPES, MARCIO; SANTOS-SILVA, ALAN R.; et al. Agrin and Perlecan Mediate Tumorigenic Processes in Oral Squamous Cell Carcinoma. PLoS One, v. 9, n. 12, DEC 15 2014. (11/22421-2, 09/54067-3, 10/19278-0)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

SAKUMA, Rebeca Kawahara. Proteômica baseada em espectrometria de massas na descoberta de candidatos à biomarcadores em câncer e na identificação de novos alvos de ADAM17. 2015. Tese de Doutorado - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia Campinas, SP.