Avaliação da ação do laser de baixa potência sobre a regeneração neuromuscular em ratos com axonotmese

• Processo: 12/02040-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2012
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Fisioterapia e Terapia Ocupacional
• Pesquisador responsável: Thiago Luiz de Russo
• Beneficiário: Aristides Leite Siqueira Junior
• Instituição Sede: Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 10/11795-6 - Avaliação da ação do laser de baixa potência sobre a regeneração neuromuscular em ratos com axonotmese, AP.R
• Assunto(s): Metaloproteinases Fatores de crescimento neural Terapia a laser Reabilitação (terapêutica médica)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Laserterapia | Lesões nervosas perifericas | metaloproteinases | Neurotrofinas | plasticidade neuromuscular | Reabilitação | Fisioterapia Neurológica

Resumo

As lesões nervosas periféricas são ocorrências clínicas comuns que afetam principalmente os nervos que percorrem os membros gerando incapacidade. O laser de baixa potência (LBP) vem sendo indicado como um recurso terapêutico eficaz na regeneração nervosa periférica. Um recente estudo do nosso laboratório mostrou que o LBP, com comprimento de onda de 660 nm e densidades de energia entre 10, 60 e 120 J/cm2, é efetivo na recuperação neuromuscular, evita a atrofia do músculo esquelético e ativa enzimas de remodelamento da matriz extracelular (MEC) no músculo e no nervo periférico. O presente projeto baseou-se neste estudo anterior, tendo a intenção de caracterizar os efeitos temporais do uso do LBP 660 nm 60 J/cm2 na regeneração neuromuscular, além de compreender quais são os mecanismos que estão envolvidos nesse processo. Portanto, o objetivo do nosso estudo será analisar o efeito do LBP (660 nm 60 J/cm2) aplicado sobre o nervo isquiático esmagado na regeneração neuromuscular em ratos após 7, 15 e 21 dias de lesão. Para este estudo serão utilizados 70 ratos Wistar (250g). Os nervos isquiáticos serão esmagados, usando uma pinça de pressão controlada gerando uma axonotmese. Os grupos serão divididos em: normal; lesão nervosa + LBP simulado diariamente nos 7, 15 e 21 dias pós-lesão; e lesão nervosa + LBP 660 nm 60 J/cm2 irradiado diariamente nos 7, 15 e 21 dias pós-lesão. Para análise funcional será realizado um teste de marcha em pista (walking-track analysis). Variáveis elétricas (reobase, cronaxia e acomodação) serão medidas para acompanhar a excitabilidade neuromuscular ao longo do experimento. Os animais serão eutanaziados em 7, 15 ou 21 dias pós-lesão, de acordo com seus grupos. Os nervos isquiáticos e os músculos tibiais anteriores (TA) serão removidos e processados. Cortes histológicos dos nervos e dos músculos serão corados com Tricrômio de Masson e Azul de Toluidina para avaliação da morfologia geral. Análises morfométricas da área de secção transversa (AST) das fibras nervosas, bainhas de mielina e axônios serão realizadas no nervo; e das fibras musculares serão medidas no ventre dos músculos TA. Fragmentos nervosos e musculares serão utilizados para avaliar a expressão gênica, por PCR em tempo real, e proteica, por western blot ou zimografia. A expressão do Fator Neurotrófico Derivado do Cérebro (BDNF) e da neurotrofina-4 (NT-4) importantes para a sobrevivência neuronal e manutenção do trofismo muscular serão investigados, bem como das metaloproteinases de matriz (MMP-2 e -9), enzimas de remodelamento da MEC que permitem o crescimento axonal, será investigada. Para análise estatística os dados serão submetidos a testes de homogeneidade (Levene) e normalidade (Shapiro-Wilk). Caso paramétricos, os dados serão submetidos aos testes Anova one-way seguido por Tukey. Um nível de significância de 5% será adotado. (AU)