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Utilização de shRNA anti-hexon e anti-IVa2 durante a produção de vírus adeno-associado como estratégia de eliminar adenovírus helper: Prova de princípio

Processo: 12/05066-7
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de julho de 2012
Vigência (Término): 30 de junho de 2014
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina
Pesquisador responsável:Bryan Eric Strauss
Beneficiário:Marlous Vinícius Gomes Lana
Instituição Sede: Instituto do Câncer do Estado de São Paulo Octavio Frias de Oliveira (ICESP). Coordenadoria de Serviços de Saúde (CSS). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Terapia genética   RNA interferente pequeno   Técnicas de transferência de genes   Adenovirus   Lentivirus   Oncologia
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:adenovirus | lentivirus | shRNA | terapia genica | transferencia genica | Virus Adeno-associado | Oncologia

Resumo

O Vírus Adeno-associado recombinante (rAAV) possui diversas vantagens que contribuem para a sua crescente aplicação na terapia gênica.O amplo tropismo, capacidade de transduzir células pós-mitóticas ou terminalmente diferenciadas, baixa frequência de integração, resposta imune moderada, alto título e expressão sustentada são características do rAAV que contribuem para a perspectiva de sua aplicação segura e bem sucedida em uma variedade de estratégias de terapia gênica. A produção de partículas de rAAV pode ser realizada por vários protocolos que, tipicamente, são muito difíceis de se realizar em larga escala. Isto se deve a complexidade da biologia do AAV e as adaptações que são incorporados nos vetores rAAV. Por exemplo, o uso de um vírus helper, como o Adenovírus, fornece fatores essenciais para a replicação do rAAV. Porém, a contaminação de estoques de rAAV com Adenovírus não é desejada e poderia prejudicar o uso do rAAV. Em outro exemplo, o uso do Adenovírus helper pode ser substituído pelo uso de um plasmídeo que codifica somente os fatores adenovirais minimamente necessários para apoiar a replicação do rAAV. Neste caso, a produção de rAAV envolve a co-transfecção de três plasmídeos (um que codifica o gene de interesse, outro que fornece genes rep e cap do AAV e o terceiro que fornece as funções helper). O problema com esta abordagem vem do procedimento de transição dos plasmídeos, um protocolo de difícilrealização em escala larga. A meta final desse trabalho é desenvolver um método de produção de vetor viral Adeno-associado independente da transfecção de plasmídeos e que minimize o risco de contaminar o estoque de rAAV com vírus helper. Nesta proposta atual, descreve-se ensaios de prova de princípio de que a utilização de RNAi contra os genes adenovirais hexon e IVa2 eliminaria a contaminação do estoque de rAAV com o adenovírus helper. O sucesso desta primeira etapa é crítico para futuramente construir um sistema aprimorado para a produção de rAAV que tambem não envolve transfecção de plasmídeos.

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Publicações científicas (7)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
MEDRANO, RUAN F., V; SALLES, THIAGO A.; DARIOLLI, RAFAEL; ANTUNES, FERNANDA; FEITOSA, VALKER A.; HUNGER, ALINE; CATANI, JOAO P. P.; MENDONCA, SAMIR A.; TAMURA, RODRIGO E.; LANA, MARLOUS G.; et al. Potentiation of combined p19Arf and interferon-beta cancer gene therapy through its association with doxorubicin chemotherapy. SCIENTIFIC REPORTS, v. 12, n. 1, p. 14-pg., . (18/04800-5, 13/09474-5, 15/26580-9, 11/10656-5, 11/21256-8, 14/11524-3, 12/05066-7)
TAMURA, RODRIGO ESAKI; DE LUNA, IGOR VIEIRA; LANA, MARLOUS GOMES; STRAUSS, BRYAN E.. Improving adenoviral vectors and strategies for prostate cancer gene therapy. Clinics, v. 73, p. 7-pg., . (12/05066-7, 11/21256-8, 16/18197-3, 13/25167-5, 15/26580-9)
LANA, M. V. G.; ANTUNES, F.; TESSAROLLO, N. G.; STRAUSS, B. E.. Stable expression of shRNA for the control of recombinant adenovirus replication. Brazilian Journal of Medical and Biological Research, v. 56, p. 8-pg., . (18/04800-5, 17/25290-2, 12/05066-7, 15/26580-9)
TAMURA, RODRIGO ESAKI; DE LUNA, IGOR VIEIRA; LANA, MARLOUS GOMES; STRAUSS, BRYAN E.. Improving adenoviral vectors and strategies for prostate cancer gene therapy. Clinics, v. 73, n. 1, . (11/21256-8, 15/26580-9, 12/05066-7, 16/18197-3, 13/25167-5)
DAVID, TAYNAH I. P.; CERQUEIRA, OTTO L. D.; LANA, MARLOUS G.; MEDRANO, V, RUAN F.; HUNGER, ALINE; STRAUSS, BRYAN E.. Response of human melanoma cell lines to interferon-beta gene transfer mediated by a modified adenoviral vector. SCIENTIFIC REPORTS, v. 10, n. 1, . (17/23068-0, 10/15025-0, 12/05066-7, 11/10656-5, 15/26580-9, 13/09474-5)
STRAUSS, BRYAN E.; OLIVEIRA SILVA, GISSELE ROLEMBERG; VIEIRA, IGOR DE LUNA; DUTRA CERQUEIRA, OTTO LUIZ; DEL VALLE, PAULO ROBERTO; VIEIRA MEDRANO, RUAN FELIPE; MENDONCA, SAMIR ANDRADE. Perspectives for cancer immunotherapy mediated by p19Arf plus interferon-beta gene transfer. Clinics, v. 73, n. 1, . (12/05066-7, 16/18197-3, 13/09474-5, 13/25167-5, 13/16074-3, 15/26580-9)
STRAUSS, BRYAN E.; OLIVEIRA SILVA, GISSELE ROLEMBERG; VIEIRA, IGOR DE LUNA; DUTRA CERQUEIRA, OTTO LUIZ; DEL VALLE, PAULO ROBERTO; VIEIRA MEDRANO, RUAN FELIPE; MENDONCA, SAMIR ANDRADE. Perspectives for cancer immunotherapy mediated by p19Arf plus interferon-beta gene transfer. Clinics, v. 73, p. 11-pg., . (12/05066-7, 16/18197-3, 13/09474-5, 13/25167-5, 13/16074-3, 15/26580-9)
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
LANA, Marlous Vinícius Gomes. Utilização de shRNA anti-hexon, anti-IVa2 e anti-pol durante a produção de vírus adeno-associado como estratégia de eliminar Adenovírus helper: prova de princípio. 2016. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD) São Paulo.

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