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Bases moleculares das alterações conformacionais e papel de resíduos de aminoácidos na trealase intestinal solúvel da larva de Spodoptera frugiperda

Processo: 12/09218-6
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de dezembro de 2012
Vigência (Término): 30 de abril de 2016
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Clelia Ferreira Terra
Beneficiário:Walciane da Silva
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:11/51685-8 - A digestão nos insetos: uma abordagem molecular, celular, fisiológica e evolutiva, AP.TEM
Assunto(s):Trealase   Insetos

Resumo

Trealases são enzimas muito importantes em insetos,fungos e nematóides, grupos que causam muitos danos ao homem. Elas tem sido pouco estudadas porque tem pouca importância em mamíferos, mas essa característica as torna um bom alvo para controle dos organismos danosos.As trealases mais estudas do ponto de vista enzimológico são as de intestino de insetos, particularmente a solúvel de Spodoptera frugiperda. Nessa enzima demonstramos o papel de alguns resíduos presentes no sítio ativo e temos evidências de que a molécula sofre consideráveis alterações conformacionais. Por modelagem molecular dessa enzima com uma trealase de Escherichia coli, a única que teve sua estrutura 3D resolvida podemos evidenciar regiões sem estrutura definida, provavelmente mais móveis, além de resíduos presentes no sítio ativo. Nesse projeto pretendemos detectar as regiões ou resíduos determinantes das modificações conformacionais, removendo porções da molécula por mutação e comparando as alterações conformacionais com aquelas ocorridas na enzima selvagem através da supressão da fluorescência de triptofano por acrilamida. Esses estudos, além de evidenciar moléculas que causam alterações conformacionais na trealase e quais os determinantes dessas alterações, podem sugerir um modo de estabilizar a molécula em uma forma mais rígida para uma futura obtenção de cristais.Pretendemos também verificar o papel de determinados resíduos presentes no sítio ativo na atividade da trealase, verificando o efeito de mutações sítio-dirigidas no valor de Km, kcat e pKa dos grupos catalíticos. Uma vez que a trealose é precursor da síntese de quitina e que a supressão da trealase foi apontada como levando a uma menor quantidade de quitina no intestino, pretendemos testar funções da membrana peritrófica .após utilização de RNA interferente.