Clonagem, expressão e estudos estruturais do domínio GTPase de septinas de Schistosoma mansoni

• Processo: 12/12113-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Vigência (Início): 01 de outubro de 2012
• Vigência (Término): 30 de novembro de 2014
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Ricardo de Marco
• Beneficiário: Yuri Volpato Santos
• Instituição Sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Cristalografia de proteínas Clonagem Expressão heteróloga Divisão celular Septinas Oligômeros Schistosoma mansoni Cromatografia Difração por raios X
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cristalografia de Proteínas | estrutura e função de proteínas | expressão heteróloga | Schistosoma mansoni | septinas | Estrutura e função de proteínas

Resumo

Septinas são proteínas pertencentes à família das GTPases, o que significa que compartilham como estrutura básica um domínio GTPase responsável pela ligação e hidrólise de GTP. Estas proteínas estão envolvidas em uma variedade de funções celulares, principalmente relacionadas ao processo de divisão celular. Septinas já foram descritas em uma variedade de organismos, sendo que seu número em cada organismo varia de 1 (em alguns tipos de algas) à 13 (em Homo Sapiens), sendo frequentemente associadas na forma de hetero-oligômeros. Através de análises bioinformáticas pudemos verificar que Schistosoma mansoni, um dos principais agentes etiológicos da esquistossomose, possui quatro genes que codificam septinas, os quais denominados Smspt 5, Smspt10, Smspt7.1 e Smspt7.2 devido à similaridade com as septinas humanas 5, 10 e 7, respectivamente. Em um projeto anterior foram feitas construções contendo apenas o domínio GTPase de dois destes genes, Smspt 5 e Smspt10. As proteínas expressas por estes domínios foram purificadas, caracterizadas biofisicamente e tiveram suas estruturas resolvidas por difração de raios-X. O presente projeto visa a realização dos mesmos experimentos para os domínios GTPase dos dois genes restantes de septinas de Schistosoma mansoni, Smspt7.1G e Smspt7.2G. Estas proteínas serão purificadas a partir do lisado bacteriano por cromatografia de afinidade seguida de cromatografia de exclusão molecular. Será feita uma análise de seu estado oligomérico em solução tampão e sua atividade GTPásica será avaliada por meio do método de cromatografia de troca iônica. Utilizando a técnica de dicroísmo circular serão feitos estudos estruturais para se ter uma idéia de como se encontram estas proteínas em termos de enovelamento em estrutura secundária. Por fim será realizado um screening de condições de cristalização para encontrar uma condição mais propícia ao crescimento de cristais.(AU)