Identificação e caracterização de proteínas que se ligam à actina (ABPs) no Apicomplexa Neospora caninum

• Processo: 12/22772-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Ana Patricia Yatsuda Natsui
• Beneficiário: Luciana Baroni
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 15/04258-8 - Proteínas que se ligam a actina (ABPs) de Neospora caninum: investigação do papel do fator de despolimerização de actina (NcADF) e da proteína associada a ciclase na dinâmica da actina, BE.EP.DR
• Assunto(s): Neospora caninum Actinas Apicomplexa
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Actina | apicomplexa | Neospora caninum | proteínas que se ligam à actina (ABPs) | Protozoologia Veterinária

Resumo

Neospora caninum é um protozoário pertencente ao filo Apicomplexa que atinge, dentre diversoshospedeiros intermediários, principalmente bovinos e tem emergido como um importante causadorde problemas reprodutivos e abortos em rebanhos de corte e leiteiro. Organismos Apicomplexassão parasitas intracelulares obrigatórios que, para locomoverem-se e realizarem a invasão dascélulas hospedeiras, utilizam um mecanismo próprio de locomoção ativa impulsionada pelo motoractina/miosina denominado motilidade por deslizamento (gliding motility), cujo complexo motor localiza-se entre as membranas plasmática e o complexo de membrana interno do parasita. Aactina de organismos Apicomplexas, que tem um papel central na motilidade por deslizamento,apresenta uma dinâmica ímpar e o seu turnover é rigorosamente regulado por proteínas que seligam à actina (ABPs - actin binding proteins). As ABPs são proteínas capazes de ligar-se à actinae atuar na polimerização e despolimerização desta. Este projeto tem como objetivo identificare caracterizar ABPs de N. caninum a partir da confecção inicial de ferramentas como anticorpoespecífico contra uma proteína recombinante, já expressa, da região pouco conservada da actinade N. caninum que compreende os aminoácidos 201 ao 310 dessa proteína (NaAct201-310) eanticorpo contra ABP de N. caninum (NcABP) recombinante. A NcABPS será escolhida após uma análise in silico de todas ABPs em N. caninum , clonada e expressa neste trabalho. Outras ferramentas a serem desenvolvidas neste projeto serão taquizoítas de N. caninum nocaute para NcABP e taquizoítas transfectados para expressão de NcABP marcada com YFP ou sob controle de sistemas de expressão por repressor Tet (TetR-tetO). A partir da obtenção dessas ferramentas, serão realizados ensaios para caracterização e avaliação da função de NcABP como utilização de taquizoítas selvagem, nocaute e transfectados em ensaios de invasão. Também serão analisados com microscopia confocal e microscopia eletrônica e por SDS-PAGE 1D e 2D, seguida de western blot e identificação dos spots e bandas por espectrometria de massas. Também serárealizada a avaliação por fluorometria da polimerização de actina de músculo de coelho com adição ou não de NcABP recombinante.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

BARONI, LUCIANA; PEREIRA, LUIZ M.; MACIVER, SUTHERLAND K.; YATSUDA, ANA P.. Functional characterisation of the actin-depolymerising factor from the apicomplexan Neospora caninum (NcADF). Molecular and Biochemical Parasitology, v. 224, p. 26-36, SEP 15 2018. (15/04258-8, 12/22772-2)

BARONIL, LUCIANA; POLLO-OLIVEIRA, LETICIA; HECK, ALBERT J. R.; MAARTEN ALTELAAR, A. F.; YATSUDA, ANA PATRICIA. Actin from the apicomplexan Neospora caninum (NcACT) has different isoforms in 2D electrophoresis. Parasitology, v. 146, n. 1, p. 33-41, JAN 2019. (12/22772-2)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

BARONI, Luciana. Identificação e caracterização de proteínas que se ligam a actina (ABPs) no apicomplexa Neospora caninum. 2017. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (PCARP/BC) Ribeirão Preto.