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Ensaios de trans-ativação em levedura para análise da interação entre o fator de transcrição E74A de D. melanogaster com a região regulatória dos CGs 7599 e 7336 de D. melanogaster

Processo: 12/24005-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de fevereiro de 2013
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2015
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Nadia Monesi
Beneficiário:Danilo Garcia Sanchez
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Insetos

Resumo

Nosso laboratório investiga mecanismos controladores de expressão gênica em metazoários. Como modelo utilizamos o gene de pufe de DNA BhC4-1 que é expresso no final do desenvolvimento larval do sciarídeo Bradysia hygida. Ensaios funcionais no organismo modelo Drosophila melanogaster resultaram na identificação de um enhancer de glândula salivar de 129 pb (-186/-58) na região promotora do gene BhC4-1. Embora os dados obtidos a partir de análises bioinformáticas e experimentos de interação gênica posicionem o fator de transcrição E74A como um regulador de BhC4-1 na glândula salivar, os mesmos não permitem determinar se ocorre interação proteína-DNA entre o fator de transcrição E74A e o enhancer de glândula salivar (-186/-58) de BhC4-1. Encontra-se em andamento no laboratório um projeto de mestrado que tem como objetivo determinar se no contexto do sistema mono-híbrido de levedura o fator de transcrição E74A de D. melanogaster é capaz de interagir diretamente com o enhancer de glândula salivar (-186/-58) de BhC4-1. O projeto aqui proposto pretende a realização de experimentos no sistema mono-híbrido que visam verificar a interação entre o fator de transcrição E74A e um fragmento genômico de 420 pb D. melanogaster localizado entre os genes L71-5 (CG7599) e L71-6 (CG7336), que contém 5 sítios de ligação para o fator de transcrição E74A. A ligação de E74A a estes sítios de ligação foi demonstrada por experimentos de proteção à DNase I e estudos funcionais revelaram que os mesmos são necessários para a correta indução de um transgene L71-6:lacZ por E74A. O desenvolvimento deste projeto permitirá verificar se no contexto do sistema mono-híbrido a proteína E74A é capaz interagir com um fragmento de DNA para o qual a interação com E74A já foi anteriormente demonstrada, o que constituirá um controle positivo importante para experimentos em andamento no laboratório.

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
FRANK, HENRIQUE OLIVEIRA; SANCHEZ, DANILO GARCIA; OLIVEIRA, LUCAS DE FREITAS; KOBARG, JORG; MONESI, NADIA. The Drosophila melanogaster Eip74EF-PA transcription factor directly binds the sciarid BhC4-1 promoter. GENESIS, v. 55, n. 11 NOV 2017. Citações Web of Science: 1.

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