A melatonina e seu efeito citoprotetor na maturação oócitos mamíferos
- Auxílios pontuais (curta duração)
| Processo: | 12/20843-0 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado |
| Vigência (Início): | 01 de março de 2013 |
| Vigência (Término): | 28 de fevereiro de 2014 |
| Área do conhecimento: | Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal |
| Pesquisador responsável: | Cláudia Lima Verde Leal |
| Beneficiário: | Mirela Batista Coelho |
| Instituição-sede: | Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil |
| Vinculado ao auxílio: | 10/51677-2 - Técnicas modernas em espectrometria de massas e desenvolvimento de novas aplicações em ciências: química, bioquímica, materiais, forense, medicina, alimentos, farmácia e veterinária, AP.TEM |
| Assunto(s): | Espectrometria de massas Maturação in vitro Melatonina |
Resumo O desenvolvimento de novas tecnologias na produção animal, assim como o conhecimento dos sistemas biológicos, são pesquisas relevantes para o progresso das biotecnologias do setor agropecuário no Brasil. Nesta atividade econômica, a área de reprodução animal tem especial interesse devido ao seu impacto na produção animal. Neste projeto, propomos a análise do perfil metabolômico da melatonina exógena e de seus possíveis metabólitos gerados em meio de maturação in vitro em oócitos da espécie bovina e suína, utilizando para tal o desenvolvimento, validação e aplicação de uma metodologia analítica de alta confiabilidade baseada em cromatografia líquida e espectrometria de massas sequencial (HPLC-MS/MS). A melatonina é um hormônio de significativa importância biológica, mas com funções pouco elucidadas no desenvolvimento oocitário e embrionário de bovinos e suínos. O método de HPLC-MS/MS desenvolvido será aplicado também na análise comparativa entre as amostras de fluído folicular obtidas das mesmas espécies e em diferentes fases do desenvolvimento, de forma a elucidar o papel da melatonina na competência oocitária e confirmar a faixa fisiológica desses metabólitos. Estudos apresentados na literatura mostram que a maturação in vitro pode ser prejudicada por estresse oxidativo causado por espécies reativas de oxigênio, frente às quais a melatonina pode apresentar efeito inativante. Resultados prévios com análise de líquido folicular bovino mostraram que a análise pelo método proposto (HPLC-MS/MS) apresentou uma linearidade com coeficiente de regressão maior que 0,99 para ambos os metabólitos propostos. Os limites de quantificação (LOQ) foram de 2.5 pg.mL-1 para os metabólitos AFMK e AMK, 5 pg.mL-1 para melatonina e 12.5 pg.mL-1 para 6HMEL e NAS, respectivamente. Os limites de detecção (LOD) foram de 0,75 pg.mL-1 para os metabólitos AFMK e AMK, 1,5 pg.mL-1 para melatonina e 3,75 pg.mL-1 para 6HMEL e NAS, respectivamente. Esses dados proporcionam o início da compreensão dos padrões fisiológicos da melatonina e de seus metabólitos em líquido folicular bovino e nos permite a questionar a atuação da melatonina em experimentos in vitro como na maturação oocitária. Esses dados ainda nos permitem delinear o possível mecanismo e suas interações da melatonina e de seus metabólitos frente às variadas condições de estresse e tentar elucidar os possíveis mecanismos desempenhados por esses compostos no sucesso do sucesso da produção in vitro de embriões bovinos. | |