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Expressão gênica diferencial, análise ultraestrutural e avaliação do perfil lipídico de blastocistos bovinos produzidos in vitro a partir de oócitos maturados convencionalmente ou pelo sistema SPOM

Processo: 12/23409-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de março de 2013
Vigência (Término): 10 de fevereiro de 2017
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:Marcelo Fábio Gouveia Nogueira
Beneficiário:Eduardo Montanari Razza
Instituição-sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:12/50533-2 - GIFT: melhoramento genômico de características relacionadas com a fertilização em gado bovino dinamarquês e brasileiro, AP.TEM
Bolsa(s) vinculada(s):15/02557-8 - Análise ultraestrutural de oócitos e blastocistos bovinos produzidos in vitro a partir de oócitos maturados na presença de moduladores de AMPc, BE.EP.DR
Assunto(s):Maturação in vitro   Lipidômica   Expressão gênica

Resumo

Na maturação in vitro (MIV) não são utilizados hormônios superestimulatórios in vivo evitando, desse modo, excessivos gastos e manipulações do animal além dos efeitos prejudiciais iatrogênicos da superestimulação ovariana. Entretanto, a eficiência dos sistemas de MIV ainda não atingem as expectativas devido à incapacidade em simular os eventos fisiológicos que ocorrem in vivo (como principal exemplo, a sincronização entre as maturações nuclear e citoplasmática do oócito). Por esta razão, o incremento dos meios de MIV é um alvo cada vez mais visado nas pesquisas da área reprodutiva. A avaliação do perfil lipídico de embriões é uma abordagem nova e, particularmente, importante para a aferição da qualidade embrionária na criopreservação. Além dos lipídios, a caracterização celular, por meio da morfologia e da distribuição das organelas, fornece resultados consistentes na caracterização do embrião, quando este é analisado ultraestruturalmente. Além disso, a expressão diferencial de genes - conhecidos como indicadores de função específica e, consequentemente, de competência embrionária - pode ser avaliada em conjunto com tais técnicas, a fim de identificar os blastocistos produzidos in vitro que possuem melhor qualidade (morfológica e fisiológica) e competência para sua posterior implantação e desenvolvimento. Portanto, o presente trabalho visa comparar o sistema de MIV convencional com um novo sistema de maturação oocitária (que simula a fisiologia do processo in vivo; SPOM) em que o uso de fármacos e o momento de sua administração são específicos (resumidamente: forskolin e IBMX na pré-maturação, por 2 h, e FSH e cilostamida nas 28 h seguintes de maturação). Oócitos maturados serão fertilizados e os blastocistos produzidos serão avaliados quanto ao perfil lipídico (espectrometria de massas MALDI-TOF-MS, Laboratório ThoMSon, Campinas), à ultraestrutura (microscopia eletrônica, Instituto de Biociências, Botucatu) e à expressão diferencial de 51 genes indicadores de qualidade e de competência embrionária (sistema microfluídico, Fluidigm). A metodologia descrita será realizada no Brasil (Instituto de Biociências, Botucatu), com animais de raça Bos indicus, e na Dinamarca (Department of Basic Animal and Veterinary Sciences, University of Copenhagen) com animais de raça Bos taurus, a fim de verificar a eficiência e a repetibilidade do sistema SPOM com diferentes cenários e genótipos. A comunhão dos dados, a serem obtidos com o presente projeto, visa fornecer um indicador geral e confiável de qualidade embrionária, que abrangesse a implantação, o desenvolvimento ou a criopreservação em rotinas comerciais de produção in vitro.

Publicações científicas (5)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
RAZZA, EDUARDO M.; PEDERSEN, HANNE S.; STROEBECH, LOTTE; FONTES, PATRICIA K.; KADARMIDEEN, HAJA N.; CALLESEN, HENRIK; PIHL, MARIA; NOGUEIRA, MARCELO F. G.; HYTTEL, POUL. Simulated physiological oocyte maturation has side effects on bovine oocytes and embryos. JOURNAL OF ASSISTED REPRODUCTION AND GENETICS, v. 36, n. 3, p. 413-424, MAR 2019. Citações Web of Science: 1.
RAZZA, EDUARDO M.; SUDANO, MATEUS J.; FONTES, PATRICIA K.; FRANCHI, FERNANDA F.; BELAZ, KATIA ROBERTA A.; SANTOS, PRISCILA H.; CASTILHO, ANTHONY C. S.; ROCHA, DANIELE F. O.; EBERLIN, MARCOS N.; MACHADO, MARIANA F.; NOGUEIRA, MARCELO F. G. Treatment with cyclic adenosine monophosphate modulators prior to in vitro maturation alters the lipid composition and transcript profile of bovine cumulus-oocyte complexes and blastocysts. REPRODUCTION FERTILITY AND DEVELOPMENT, v. 30, n. 10, p. 1314-1328, SEP 2018. Citações Web of Science: 2.
BOTIGELLI, RAMON CESAR; RAZZA, EDUARDO MONTANARI; PIOLTINE, ELISA MARIANO; FONTES, PATRICIA KUBO; LANCELLOTTI SCHWARZ, KATIA REGINA; VERDE LEAL, CLAUDIA LIMA; GOUVEIA NOGUEIRA, MARCELO FABIO. Supplementing in vitro embryo production media by NPPC and sildenafil affect the cytoplasmic lipid content and gene expression of bovine cumulus-oocyte complexes and embryos. REPRODUCTIVE BIOLOGY, v. 18, n. 1, p. 66-75, MAR 2018. Citações Web of Science: 2.
BOTIGELLI, RAMON CESAR; RAZZA, EDUARDO MONTANARI; PIOLTINE, ELISA MARIANO; GOUVEIA NOGUEIRA, MARCELO FABIO. New approaches regarding the in vitro maturation of oocytes: manipulating cyclic nucleotides and their partners in crime. JORNAL BRASILEIRO DE REPRODUCAO ASSISTIDA, v. 21, n. 1, p. 35-44, JAN-MAR 2017. Citações Web of Science: 4.
CASTILHO, A. C. S.; NOGUEIRA, M. F. G.; FONTES, P. K.; MACHADO, M. F.; SATRAPA, R. A.; RAZZA, E. M.; BARROS, C. M. Ovarian superstimulation using FSH combined with equine chorionic gonadotropin (eCG) upregulates mRNA-encoding proteins involved with LH receptor intracellular signaling in granulosa cells from Nelore cows. Theriogenology, v. 82, n. 9, p. 1199-1205, DEC 2014. Citações Web of Science: 3.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
RAZZA, Eduardo Montanari. Expressão gênica diferencial, análise ultraestrutural e avaliação do perfil lipídico de blastocistos bovinos produzidos in vitro a partir de oócitos maturados convencionalmente ou pelo sistema SPOM. 2017. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Instituto de Biociências (Campus de Botucatu)..

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