Busca de ligantes do sindecam-1 utilizando abordagem de proteômica quantitativa

• Processo: 13/02257-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2017
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Adriana Franco Paes Leme
• Beneficiário: Flávia da Silva Zandonadi
• Instituição Sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 10/19278-0 - Estudo da regulação de ADAMs em câncer oral, AP.JP
• Bolsa(s) vinculada(s): 15/16284-3 - Determinação Estrutural e Biológicos das Interações Protein-Heparano Sulfato, BE.EP.DR
• Assunto(s): Espectrometria de massas Neoplasias
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | Espectrometria de massas | Proteômica quantitativa | sindecam-1 | Câncer

Resumo

Sindecanos são uma família de proteoglicanos de superfície celular que estão envolvidos em inúmeros processos biológicos, como migração, proliferação e adesão. Estudo do nosso grupo mostra que o sindecam-1 foi encontrado na forma solúvel em carcinoma de células escamosas (SCC-9) quando tratadas com forbol-ester (PMA). Esse aumento na forma solúvel foi associado com diminuição do sindecam-1 ligado à membrana. Interessantemente, essas células apresentaram maior migração e menor adesão celular quando comparada ao controle sem tratamento. Uma nova informação observada nesse estudo foi que o peptídeo derivado do sindecam-1 também foi encontrado em maior abundância nas mesmas células, principalmente quando tratadas com PMA. Esse peptídeo por sua vez foi capaz de induzir migração em células HaCaT e SCC-9. Assim, de acordo com os dados da literatura e os dados mostrados no nosso estudo, acredita-se que, entre outros, dois mecanismos estejam regulando a migração celular no que se refere à sinalização via sindecam-1: a perda do sindecam-1 da membrana como também a sinalização realizada pelo peptídeo. Dessa forma, esse projeto visa continuar esse estudo do nosso grupo com o objetivo de avaliar os mecanismos de sinalização do sindecam-1 A estratégia escolhida para ajudar explicar essa questão será identificar os parceiros ligantes do sindecam-1 solúvel para avaliar a rede de interações do sindecam-1. Para isso, as células HaCaT (não tumorigênicas) e SCC-9 (tumorigênicas) serão marcadas metabolicamente por Stable-Isotope Labeling by Amino Acids (SILAC), transfectadas de forma transiente com o sindecam-1, e em seguida ativadas por (PMA). Os complexos de sindecam-1+ligantes solúveis no meio de cultivo serão imunoprecipitados e a identificação dos mesmos será realizada por proteômica quantitativa. Para validação da identidade desses complexos será realizado Western blot com anticorpo específico para cada ligante e experimentos de co-localização. Uma vez confirmados os parceiros do sindecam-1, alguns serão escolhidos para caracterização da interação por ensaio de fase sólida e cross-linking químico seguido por espectrometria de massas. Em seguida, o papel funcional dessa interação será estudado utilizando-se perda de função por iRNA do ligante de interesse em ensaios de migração e adesão. Espera-se que esse projeto possa contribuir para o conhecimento dos mecanismos de sinalização do sindecam-1 pelo o conhecimento de seus parceiros ligantes.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ZANDONADI, FLAVIA S.; YOKOO, SAMI; GRANATO, DANIELA CAMPOS; RIVERA, CESAR; SOARES MACEDO, CAROLINA CARNEIRO; SOARES, CIRO DANTAS; CARNIELLI, CAROLINA MORETTO; DOMINGUES, ROMENIA RAMOS; PAULETTI, BIANCA A.; CONSONNI, SILVIO ROBERTO; et al. Follistatin-related protein 1 interacting partner of Syndecan-1 promotes an aggressive phenotype on Oral Squamous cell carcinoma (OSCC) models. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 254, p. 13-pg., 2022-03-15. (13/02257-9, 18/18496-6, 16/50005-7, 18/15535-0, 16/07846-0, 19/18751-9, 09/54067-3, 10/19278-0)

ZANDONADI, FLAVIA S.; SANTA CRUZ, ELISA CASTANEDA; KORVALA, JOHANNA. New SDC function prediction based on protein-protein interaction using bioinformatics tools. COMPUTATIONAL BIOLOGY AND CHEMISTRY, v. 83, DEC 2019. (13/02257-9)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

ZANDONADI, Flávia da Silva. Sindecam-1 e folistatina-1 foram identificados em um mesmo complexo de interação e interferem em eventos associados à invasão e proliferação celular. 2017. Tese de Doutorado - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia Campinas, SP.