| Processo: | 12/14859-0 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado |
| Vigência (Início): | 01 de junho de 2013 |
| Vigência (Término): | 31 de maio de 2015 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Morfologia - Embriologia |
| Pesquisador responsável: | José Xavier Neto |
| Beneficiário: | Carlo Donato Simões Caiaffa Feliciano de Carvalho |
| Instituição Sede: | Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Células-tronco embrionárias Ácido retinoico Receptores nucleares órfãos Fator II de transcrição COUP Cadeias pesadas de miosina Expressão gênica Técnicas do sistema de duplo-híbrido |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | ácido retinóico | Câmara Cardíaca | Coup-Tfii | Ecrrn | Raldh2 | SMyHC3 | Desenvolvimento Cardíaco |
Resumo O desenvolvimento embrionário integra diferentes níveis de organização que são ativados e distribuídos durante os eventos de especialização celular em tecidos e órgãos. Nos últimos 14 anos, nosso grupo gerou fortes evidências de que a sinalização pelo ácido retinóico (AR) é fundamental para a especificação das células progenitoras cardíacas em domínios anteriores e posteriores, que originam tecidos ventriculares e sino-atriais respectivamente. Durante o início da somitogênese, o AR induz uma onda caudo-rostral de expressão de RALDH2, que se estende da placa lateral da mesoderme até a região posterior do campo cardíaco. O gene SMyHC3 (slow myosin heavy chain 3), caracterizado inicialmente em codornas (Coturnix japonica), apresenta um padrão de expressão preferencial no átrio devido a presença de elementos contidos na região promotora, responsáveis por ativar este gene nas células precursoras de átrios e reprimi-lo em precursores de ventrículos. Para compreender esta característica, um fragmento de 840 pares de bases do promotor do gene SMyHC3 foi utilizado para dirigir a expressão da fosfatase alcalina humana (HAP) em camundongos transgênicos. A marcação do gene repórter indicou que o transgene é induzido por AR, e que a ativação do promotor se localiza na região sino-atrial, um padrão de expressão coincidente com os territórios cardíacos ricos na expressão de RALDH2, e com a produção de AR endógeno. Nosso grupo isolou um elemento complexo de resposta a receptores nucleares com 33 pb (ECRRN), que está inserido em um domínio de regulação atrial no promotor do gene SMyHC3. Ensaios de mobilidade eletroforética, utilizando uma sonda controle para competir contra o ECRRN pela ligação a receptores de AR (RAR/RXR), demonstram que o heterodímero RAR/RXR não exerce influência significativa sobre o promotor do gene SMyHC3, sugerindo que o papel do AR na ativação do promotor pode ser indireto. Resultados recentes do nosso grupo demonstram que o receptor nuclear órfão COUP-TFII (Chicken Ovalbumin Upstream Promoter - Transcription Factor 2) é capaz de ativar a região promotora de SMyHC3 em ensaios de transfecção, enquanto experimentos de RNA de interferência contra COUP-TFII inibiram a ativação. Com a finalidade de dissecar o mecanismo de ativação do promotor SMyHC3, pretendemos identificar os parceiros de interação com COUP-TFII utilizando a tecnologia de duplo-híbrido em leveduras. Em uma abordagem paralela empregaremos o sistema mono-híbrido para identificar as proteínas capazes de se associar ao ECRRN. Para descobrir o complexo de ligantes que interage com COUP-TFII, à jusante da ação do AR durante a especificação das câmaras cardíacas, uma estratégia que associa imunoprecipitação e espectrometria de massas também será utilizada no decorrer deste projeto. (AU) | |
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