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Geração de novos mutantes da proteína eIF5A utilizando a estratégia de alanine scanning

Processo: 13/06939-7
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de junho de 2013
Vigência (Término): 31 de maio de 2014
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Cleslei Fernando Zanelli
Beneficiário:Priscila Akemi Yamamoto
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:10/50044-6 - Controle da expressão gênica em nível traducional: estudo do papel de elF5A na elongação da tradução, AP.TEM
Assunto(s):Processamento de proteína pós-traducional   Saccharomyces cerevisiae

Resumo

O fator de início de tradução 5A (eIF5A) é altamente conservado em arqueas e eucariotos e essencial para a viabilidade celular. Trata-se da única proteína que contém o aminoácido hipusina, essencial para a função de eIF5A e gerado por uma modificação pós-traducional. Após ter sido envolvido em diversos processos celulares, apenas mais recentemente foi melhor definido um papel para eIF5A no processo de síntese proteica, mais especificamente durante a etapa de elongação da tradução. Para melhorar o entendimento e a descrição do mecanismo de eIF5A na tradução, é necessário determinar como ocorre a ligação entre eIF5A e o ribossomo e em que tipo de complexo ribossomal eIF5A se liga. Resultados recentes de nosso laboratório revelaram ligação direta de eIF5A de levedura apenas na subunidade maior do ribossomo, sendo a hipusinação requerida para esta interação. Com o intuito de se caracterizar os pontos de interação entre eIF5A e a maquinaria de tradução, é proposta para este projeto a geração de mutantes através da estratégia de "charge cluster-to-alanine scanning". Posteriormente ensaios de co-purificação in vivo e in vitro para caracterização dos resíduos importantes para as interações com o ribossomo serão realizados. Os resultados deste trabalho irão contribuir significativamente para a caracterização dos resíduos que participam das interações diretas entre eIF5A e o ribossomo. (AU)