Ação in vitro da instrumentação rotatória associada ao extrato de própolis em neutralizar os efeitos do ácido lipoteicóico (LTA) de Enterococcus faecalis em induzir produção de citocinas pró-inflamatórias (IL-1², TNF-± e IL-6) por macrófagos

• Processo: 13/01491-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Luciane Dias de Oliveira
• Beneficiário: Carolina Oliver da Silva
• Instituição Sede: Instituto de Ciência e Tecnologia (ICT). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José dos Campos. São José dos Campos , SP, Brasil
• Assunto(s): Bactérias gram-positivas Medicação intracanal Ácido lipoteicoico Citocinas Enterococcus faecalis Macrófagos Citotoxicidade Técnicas in vitro Teste de Tukey
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ácido Lipoteicóico | citotoxicidade | instrumentação rotatória | irrigante do canal radicular | Medicação intracanal | propolis | Microbiologia Aplicada

Resumo

Bactérias Gram-positivas liberam como importante fator de virulência o ácido lipoteicóico (LTA), que é estrutural e imunologicamente semelhante ao lipopolissacarídeo (LPS) das bactérias Gram-negativas, sendo importante sua remoção e/ou neutralização de seus efeitos citotóxicos no sistema de canais radiculares. Com isso, o objetivo deste estudo será avaliar a eficácia da instrumentação rotatória com instrumentos níquel-titânio associada ao extrato glicólico de própolis e medicações intracanais em neutralizar os efeitos citotóxicos do LTA de Enterococcus faecalis em canais radiculares, analisando a produção de citocinas pró-inflamatórias (IL-1², TNF-±, IL-6) por macrófagos (RAW 264.7). Para tanto, serão utilizados 36 dentes humanos unirradiculados com tamanho padronizado em 16 mm. Os canais radiculares serão inicialmente preparados até instrumento BR2 (25/0.04) e os espécimes serão distribuídos em microplacas (n=12). Após esterilização (radiação gama Co60), serão realizadas 3 inoculações repetidas, a cada 24 hs, de 10 ¼L de solução de LTA de E. faecalis nos canais radiculares. Após, será realizada a instrumentação dos canais com 5 instrumentos rotatórios NiTi (sistema BioRaCe), segundo especificações do fabricante, na seguinte sequência: BR3 (25/0.06); BR4 (35/0.04); BR5 (40/0.04); BR6 (50/0.04) e BR7 (60/0.02), utilizando extrato glicólico de própolis 12% como irrigante. Após aplicação de EDTA (3 min), os espécimes serão divididos em 3 grupos (n=12) de acordo com a medicação intracanal (MIC): HC) hidróxido de cálcio com solução fisiológica; CLX) clorexidina gel 2%; CLX+HC) clorexidina gel 2% + hidróxido de cálcio. A MIC permanecerá por 14 dias. No total, serão realizadas três coletas do canal radicular: 1ª) imediatamente após a instrumentação; 2ª) após EDTA; 3ª) após remoção da MIC. Estas amostras serão utilizadas para verificar se os protocolos de tratamento apresentam capacidade de neutralizar os efeitos citotóxicos do LTA. Macrófagos da linhagem RAW 264.7, mantidos a 37æC/5% CO2 em meio DMEM enriquecido com soro fetal bovino, serão ativados com as amostras coletadas dos canais. Após 24 hs, os sobrenadantes da cultura celular serão coletados e utilizados para verificar a produção de citocinas pró-inflamatórias (IL-1², TNF-± e IL-6) pelo teste imunoenzimático (ELISA). Os resultados serão analisados estatisticamente (ANOVA e teste de Tukey, 5%).