Influência da 5-Hidroximetilcitosina na Reprogramação Nuclear de Bovinos

• Processo: 13/07160-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2013
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Flávio Vieira Meirelles
• Beneficiário: Rafael Vilar Sampaio
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Assunto(s): Epigênese genética Transferência nuclear Epigenômica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: epigenética | iPS | Transferência nuclear | Epigenética

Resumo

A reprogramação nuclear de uma célula somática a um estado embrionário tem diversas aplicações, como pesquisas básicas na biologia do desenvolvimento, aplicações médicas em terapia celular, melhoramento genético na agropecuária e conservação de espécies. As principais técnicas utilizadas na reprogramação nuclear são a transferência nuclear de células somáticas (TNCS) e a geração de células tronco induzidas (iPS). Muitos trabalhos tem mostrado uma baixa eficiência no processo de reprogramação nuclear nas duas técnicas, além disso, modificações epigenéticas tem sido apontadas como a principal barreira para uma reprogramação nuclear eficiente. As principais modificações epigenéticas são a metilação do DNA e modificações da proteína histona, como acetilação e metilação. Recentemente, a descoberta de mais uma modificação epigenética, a 5-hidroximetilcitosina (5hmC), relacionada ao mecanismo ativo de desmetilação do DNA, oferece uma nova abordagem no entendimento dos mecanismos envolvidos na reprogramação nuclear. Por isso, o objetivo deste trabalho é investigar a influência da 5hmC na reprogramação nuclear de bovinos, bem como utilizar novas estratégias para aumentar a eficiência das principais técnicas de reprogramação. Para isso, analisaremos o perfil epigenético (5mC, 5hmC, H3K9ac e H3K9me2) de células com diferentes níveis de diferenciação celular e as utilizaremos como doadoras de núcleo na TNCS. Além disso, visando facilitar o mecanismo de oxidação do DNA por meio da 5hmC, trataremos linhagens celulares com um agente modificador da cromatina (BIX-01294) para utilizá-las como doadoras de núcleo na TNCS e iPS. O perfil epigenético dos zigotos e das células geradas será analisado quanto a influência do tratamento nos principais marcadores. Assim, esperamos estabelecer a relação entre os níveis de 5hmC nas células doadoras de núcleo ao grau de eficiência da desmetilação do DNA durante a reprogramação nuclear.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SAMPAIO, RAFAEL VILAR; SANGALLI, JULIANO RODRIGUES; CAMARA DE BEM, TIAGO HENRIQUE; AMBRIZI, DEWISON RICARDO; DEL COLLADO, MAITE; BRIDI, ALESSANDRA; CAVALCANTE MENDES DE AVILA, ANA CLARA FAQUINELI; MACABELLI, CAROLINA HABERMANN; OLIVEIRA, LILIAN DE JESUS; DA SILVEIRA, JULIANO COELHO; et al. Catalytic inhibition of H3K9me2 writers disturbs epigenetic marks during bovine nuclear reprogramming. SCIENTIFIC REPORTS, v. 10, n. 1, JUL 13 2020. (15/08807-6, 14/22887-0, 13/08135-2, 14/50947-7, 14/21034-3, 15/25111-5, 12/50533-2, 13/07160-3)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

SAMPAIO, Rafael Vilar. Modificações epigenéticas da cromatina e sua relação com a reprogramação nuclear de bovinos. 2015. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ/SBD) Pirassununga.