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Contribuição da elevação da esteroidogênese e/ou da deficiência da NADP-transidrogenase no estresse oxidativo mitocondrial das células de camundongos hipercolesterolêmicos

Processo: 13/05497-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2013
Vigência (Término): 31 de maio de 2017
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Geral
Pesquisador responsável:Helena Coutinho Franco de Oliveira
Beneficiário:Alessandro Gonzalez Salerno
Instituição-sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):16/01044-0 - Efeitos do transplante de células-tronco mesenquimais no estresse oxidativo em camundongos GSNOR-/- e seus controles C57BL6/J, BE.EP.PD
Assunto(s):Hipercolesterolemia   Esteroidogênese

Resumo

Em trabalhos publicados por nosso grupo, demonstramos que há uma importante contribuição das mitocôndrias no estabelecimento de um estresse oxidativo em tecidos de camundongos geneticamente hipercolesterolêmicos, o que pode ser relevante para a aterogênese destes animais. As mitocôndrias destes animais apresentaram uma diminuição de seu conteúdo de NADPH, principal poder redutor para reconstituição do sistema enzimático glutationa redutase/peroxidase. Também demonstramos que havia aumento da lipogênese e esteroidogênese hepática, o que nos levou a propor que estes processos biossintéticos eram responsáveis pelo consumo de grandes quantidades de NADPH. A inibição farmacológica da esteroidogênese não pôde ser usada como contraprova de nossa proposta devido a efeitos tóxicos de estatinas diretamente nas mitocôndrias. Desta maneira, nossa hipótese de que o estresse oxidativo mitocondrial estará reduzido em paralelo com a redução da síntese de colesterol necessita de uma abordagem molecular (antisense oligonucleotides e/ou RNAs de interferência para o knockdown in vivo e in vitro da HMGCoA). Como estes animais também apresentam deficiência genética da NADP-transidrogenase mitocondrial ou transidrogenase de nucleotídeos de nicotinamida (NNT) em seu background (C57BL6/J), uma enzima essencial para manutenção do teor de NADPH na mitocôndria, ela também será objeto de nossa investigação. Para tanto usaremos o knockdown da NNT em camundongos selvagens e a transfecção da NNT em células dos camundongos hipercolesterolêmicos. Assim, neste projeto pretendemos determinar a origem do estresse oxidativo mitocondrial observado em tecidos e células dos camundongos hipercolesterolêmicos. Nossa hipótese é que a depleção do NADPH demonstrado nestas mitocôndrias seja conseqüência de duas possibilidades, mutuamente não excludentes: aumento de esteroidogênese e deficiência da NNT. Portanto, usando ferramentas moleculares em estudos in vivo e in vitro, em células geneticamente manipuladas, pretendemos quantificar a contribuição relativa de cada um destes processos.