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Estudos de proteínas na rede proteômica da Hsp90 eucarioto: caracterização funcional da co-chaperona p23 humana e de Leishmania braziliensis e um provável ortólogo da hsp100/clpb de metazoário utilizando levedura como um sistema de expressão heterólogo

Processo: 13/11500-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de setembro de 2013
Vigência (Término): 31 de agosto de 2014
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
Pesquisador responsável:Carlos Henrique Inacio Ramos
Beneficiário:David Zachary Mokry
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:12/50161-8 - Estudo da estrutura e função da chaperona Hsp90 com ênfase no seu papel em homeostase celular, AP.TEM

Resumo

A manutenção da homeostase protéica é crítica para a sobrevivência celular, e as chaperonas moleculares são essenciais para esse processo. Uma proteína importante para facilitar o enovelamento é a Hsp90, que também apresenta papel fundamental em uma série de funções celulares, como proteostase, epigenética, manutenção telomérica, imunidade inata, sinalização biológica, entre outros. Assim, a ruptura da função da Hsp90 pode ter consequências dramáticas, se não letal, para o organismo. Um exemplo disso, inclui o fato de que vários tipos de câncer são dependentes da atividade aumentada da Hsp90, fazendo desta um importante alvo para drogas. Além disso, interferência na atividade da Hsp90 tem sido recentemente o objetivo na concepção de agentes antiparasitários. Curiosamente, alguns protozoários, como a Leishmania braziliensis, contém duas formas de p23, uma co-chaperona Hsp90 e um modulador de atividade da Hsp90, enquanto que outros organismos contém somente uma forma. Da mesma forma, o ortólogo humano da p23 pode sofrer clivagem da caspase para P18, que tem função diferente da P23, e tem sido implicada em apoptose. Por último, algumas co-chaperonas Hsp90 tem sido descritas como interatoras da Hsp104, e nós propomos que esta função é conservada em eucariotas superiores. Este projeto tem o objetivo de aprofundar o conhecimento sobre as interações que a Hsp90 participa por 1) caracterizar as variantes humana e da Leishmania braziliensis da proteína p23 usando leveduras como um sistema de expressão para medir a atividade in vivo, 2) aprofundar estudos para estabelecer uma atividade de proteína similar à Hsp104 em metazoários (ClpB homolog) por determinar como a sua expressão heteróloga em levedura afeta um conjunto de proteínas formadoras de agregados insolúveis, e 3) usar levedura como um sistema de expressão para purificar a "ClpB homolog" a fim de realizar ensaios de atividade bioquímica in vitro. Estes estudos irão contribuir significativamente para o aumento do conhecimento da função das chaperonas.