Análise da função de vesículas secretadas em líquido folicular na maturação de oócitos e no controle de mudanças epigenéticas

• Processo: 13/10473-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Flávio Vieira Meirelles
• Beneficiário: Juliano Coelho da Silveira
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 12/50533-2 - GIFT: melhoramento genômico de características relacionadas com a fertilização em gado bovino dinamarquês e brasileiro, AP.TEM
• Assunto(s): MicroRNAs Comunicação celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: células da granulosa e do cúmulus | Comptetência de oócito e desenvolvimento embrionário | Desenvolvimento de folículo ovariano | Exossomos e microvesículas | miRNAs | vesículas secretadas por células | Comunicação celular

Resumo

O uso de técnicas de reprodução assistida é uma alternativa para solucionar problemas reprodutivos assim como aumentar a velocidade de seleção em espécies de valor agronômico. Todavia, existe a preocupação de que o cultivo in vitro assim como a injeção intracitoplasmática de esperma possam gerar mudanças epigenéticas as quais podem levar à maior pré-disposição a problemas reprodutivos na vida adulta. Mudanças epigenéticas normalmente são reguladas por metilação assim como por microRNAs. MicroRNAs são RNAs não codificadores de proteínas que regulam a expressão gênica durante diferentes processos de diferenciação de tecidos. Recentemente, vesículas secretadas por células chamadas de exossomos e microvesículas foram encontradas em diferentes fluidos corporais (incluindo o líquido folicular) contendo material bioativo incluindo proteínas e miRNAs. Vesículas secretadas por células são consideradas uma nova classe de comunicação celular com implicações em diferentes processos fisiológicos. Portanto, a hipótese que será testada é que vesículas secretadas por células foliculares contendo proteínas e miRNAs são capazes de modular mudanças epigenéticas durante o desenvolvimento in vitro de oócitos e embriões. Para testar esta hipótese, folículos ovarianos (3-4 mm) serão isolados e os oócitos maturados in vitro. Baseado nos resultados, os oócitos serão designados a três diferentes grupos de acordo com a competência de maturação e fertilização (grupos). De maneira retrospectiva, vesículas serão isoladas a partir de líquido folicular e utilizadas para os experimentos de acordo com o grupo de origem. O primeiro objetivo é determinar conteúdo proteico e de RNA (mRNA, miRNA, lncRNA e snoRNA) de microvesículas e exossomos isolados no líquido folicular em relação a competência dos oócitos. O segundo objetivo é determinar a origem celular de vesículas isoladas em líquido folicular com base em marcadores proteicos e de RNA. O terceiro objetivo é avaliar a função de exossomos e microvesículas durante a maturação in vitro de oócitos e o desenvolvimento embrionário inicial, avaliando assim as mudanças epigenéticas. Os resultados deste projeto ajudarão a estabelecer o papel de vesículas secretadas por células do folículo ovariano em relação a mudanças epigenéticas adquiridas durante o cultivo in vitro de oócitos e embriões, permitindo o desenvolvimento de novas ferramentas terapêuticas para espécies domésticas e humanos.

Publicações científicas

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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DA SILVEIRA, JULIANO C.; DE ANDRADE, GABRIELLA M.; NOGUEIRA, MARCELO F. G.; MEIRELLES, FLAVIO V.; PERECIN, FELIPE. Involvement of miRNAs and Cell-Secreted Vesicles in Mammalian Ovarian Antral Follicle Development. REPRODUCTIVE SCIENCES, v. 22, n. 12, p. 1474-1483, DEC 2015. (13/10473-3, 12/50533-2, 13/08135-2)

DA SILVEIRA, JULIANO C.; DE AVILA, ANA CLARA F. C. M.; GARRETT, HANNAH L.; BRUEMMER, JASON E.; WINGER, QUINTON A.; BOUMA, GERRIT J.. Cell-secreted vesicles containing microRNAs as regulators of gamete maturation. Journal of Endocrinology, v. 236, n. 1, p. R15-R27, JAN 2018. (13/10473-3, 15/16985-1, 12/50533-2, 17/02037-0, 14/22887-0)

ANDRADE, G. M.; MEIRELLES, F. V.; PERECIN, F.; DA SILVEIRA, J. C.. Cellular and extracellular vesicular origins of miRNAs within the bovine ovarian follicle. REPRODUCTION IN DOMESTIC ANIMALS, v. 52, n. 6, p. 1036-1045, DEC 2017. (13/10473-3, 13/08135-2, 12/50533-2, 14/22887-0, 14/21034-3)

DA SILVEIRA, JULIANO C.; ANDRADE, GABRIELLA M.; DEL COLLADO, MAITE; SAMPAIO, RAFAEL V.; SANGALLI, JULIANO R.; SILVA, LUCIANO A.; PINAFFI, FABIO V. L.; JARDIM, IZABELLE B.; CESAR, MARCELO C.; NOGUEIRA, MARCELO F. G.; et al. Supplementation with small-extracellular vesicles from ovarian follicular fluid during in vitro production modulates bovine embryo development. PLoS One, v. 12, n. 6, JUN 15 2017. (13/10473-3, 13/08135-2, 12/50533-2, 14/22887-0, 14/21034-3)