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Estudo da expressão gênica e proteica da mioglobina e da Citoglobina em modelo de ratos com hipotireoidismo subclínico

Processo: 13/11910-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de setembro de 2013
Vigência (Término): 31 de agosto de 2014
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Anatomia Patológica e Patologia Clínica
Pesquisador responsável:Gisele Giannocco
Beneficiário:Micaela Frasson Montero
Instituição-sede: Faculdade de Medicina do ABC (FMABC). Organização Social de Saúde. Fundação do ABC. Santo André , SP, Brasil
Assunto(s):Mioglobina   Endocrinologia

Resumo

INTRODUÇÃO: O hipotireoidismo subclínico (HS) está associado ao aumento do risco de doenças cardiovasculares. A mioglobina (Mb) e a citoglobina (Cygb) são proteínas que servem como reservatórios de oxigênio e protegem contra espécies reativas de oxigênio, no músculo cardíaco de ratos com HS. Ainda não se esclareceu sobre os mecanismos que controlam a sua expressão e seus níveis no HS, que podem contribuir no aparecimento de danos celulares e de doenças.OBJETIVOS: Investigar níveis de expressão gênica e protéica de Mb e da Cygb, e avaliar expressão gênica de proteínas de defesa antioxidantes: superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPX) em ratos com HS.MÉTODOS: Serão usados ratos Wistar machos com 8 semanas de idade, do biotério da FMABC, distribuídos nos seguintes grupos: (a) Controle (C): serão ratos que receberão salina ip e serão submetidos à eutanásia após 20 dias da cirurgia fictícia (n=8); (b) Hipotireoideo (Tx): serão ratos submetidos a tiroidectomia total e tratados com metimazol (0,01%) e que receberão salina ip por 20 dias sendo submetidos à eutanásia após esse período (n=8); (c) Hipertireoideo (Tx+T4): ratos Tx que receberão T4 (dose 0,8 µg/100g, ip) por 5 dias sendo submetidos à eutanásia após esse período (n=8); (d) Hipotireoideo subclínico (HS): serão ratos submetidos a tiroidectomia parcial que receberão salina ip por 15 dias sendo submetidos à eutanásia após esse período (n=8); (e) Hipotireoideo subclínico tratado com tiroxina (HS+T4): serão ratos submetidos a tiroidectomia parcial que receberão T4 (dose 0,8 µg/100g, ip) por 5 dias sendo submetidos à eutanásia após esse período (n=8). Após os períodos determinados, os animais serão anestesiados e o sangue colhido para posterior dosagem de T3, T4 e TSH sérico. A eutanásia será feita por exsanguinaçao e remoção cirúrgica do coração com o animal sob anestesia. O ventrículo será removido, congelado em nitrogênio líquido e armazenado no freezer -80ºC e posteriormente será submetido à avaliação da expressão gênica e protéica da Mb e da Cytb por reação em cadeia de polimerase em tempo real (qPCR) e western blot, respectivamente. Os dados, tanto do Real Time PCR quanto os valores de densitometria dos blots do western blot serão analisados no Excel- Microsoft Office e as amostras a serem estudadas serão normalizadas pelos seus controles correspondentes. Os dados obtidos serão analisados por análise de variância (One way ANOVA) com pós-teste Student Newman Keuls. As diferenças serão consideradas significativas para valores de p<0.05.