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Cultivo in vitro de células luteais bovinas esteroidogênicas e não esteroidogênicas. efeito da PGF2± na expressão de genes e proteínas ligados à esteroidogênese e apoptose

Processo: 13/00992-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de setembro de 2013
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2016
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:João Carlos Pinheiro Ferreira
Beneficiário:Flavia Caroline Destro
Instituição-sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):15/01940-2 - Cultivo in vitro de células luteais bovinas esteroidogênicas e não esteroidogênicas. efeito da PGF2± na expressão de genes e proteínas ligados à esteroidogênese e apoptose, BE.EP.DR
Assunto(s):Corpo lúteo   Cultura de células   Bovinos

Resumo

Este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito da PGF2± sobre a expressão gênica e proteica de substâncias envolvidas na esteroidogênese (StAR), na produção intraluteal de PGF2± (PGTS, PTGFS, HPGD) na indução da apoptose (CASP-3, Bax, Bcl2) e genes do sistema imune que possuem expressão aumentada durante o processo de luteólise funcional e que estimulam a síntese intraluteal de prostaglandina (IL-8 e FAS) no cultivo de células do corpo lúteo. Para tanto serão realizado três experimentos. No Experimento 1 serão utilizados CLs advindos de abatedouros, os quais serão devidamente processados em laboratório e as células luteais esteroidogênicas cultivadas por 48 horas, a fim de se observar a ação da PGF2± in vitro desse tipo celular. Essas células receberão os seguintes tratamentos: Grupo Controle: 1,0mL de meio de cultivo base, que após as 48 horas de cultivo uma parte desse meio será trocado por 1,0 mL de meio de cultivo base, consecutivamente a cada 6 horas; Grupo PGF2±: 10-6M PGF2± (Sigma® P 0424; KORZEKWA et al., 2008) diluído em 1,0 mL de meio de cultivo base, que após 48 horas de cultivo, uma parte desse meio será trocado e adicionado novamente 10-6M PGF2± diluído em 1,0 mL de meio de cultivo base em um intervalo de 6 horas até que se complete 24 horas. As células cultivadas serão avaliadas morfologicamente pela coloração com Oil Red e Hematoxilina, expressão gênica (qRT-PCR) e proteica (Imunofluorescência) para STAR, , PTGS2, PTGFS, HPGD, IL-8, FAS, CASP-3, Bax, Bcl-2, e por fim será dosada a progesterona (P4) do meio de cultivo pela técnica de radioimunoensaio (RIA). No Experimento 2 será realizado o co-cultivo das células luteais esteroidogênicas (CLEs), células luteais endoteliais (CLEn) e células do sistema imune (CSI) a fim de se observar a ação da PGF2± nesses tipos celulares in vitro. As CLEs serão novamente cultivadas por 48 horas, passado esse período as CLEn e CSI, serão adicionadas e pré-incubadas por 2 horas (Co-cultivo), dando início aos mesmos tratamentos e avaliações realizadas no Experimento 1. O Experimento 3 tem como objetivo observar a ação da PGF2± in vitro com o tratamento com essa droga em diferentes momentos. Para isso os poços da placa de cultivo contendo os três tipos celulares (CLEs, CLEn, CSI) receberão 5 aplicações de PGF2±; ou 5 aplicações de meio de cultivo base; ou 5 aplicações de PGF2± (1º, 3º e 5º momento) e os demais momentos (2º e 4º) receberão apenas meio de cultivo base. As técnicas para avaliação morfológica, expressão gênica e proteica e dosagem de P4 serão idênticas ao Experimento 1. Os dados obtidos serão tabulados e testes estatísticos adequados serão realizados.

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DESTRO, F. C.; MARTIN, I.; LANDIM-ALVARENGA, F. D. C.; FERREIRA, J. C. P.; PATE, J. L. Effects of concanavalin A on the progesterone production by bovine steroidogenic luteal cells in vitro. REPRODUCTION IN DOMESTIC ANIMALS, v. 51, n. 5, p. 848-852, OCT 2016. Citações Web of Science: 0.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
DESTRO, Flavia Caroline. Produção de progesterona pelas células luteínicas esteroidogênicas bovina cultivadas e co-cultivadas in vitro. 2016. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia..

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