Efeito da presença de espermatozoides sexados no transcriptoma e proteoma das células da tuba uterina

• Processo: 13/12089-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2013
• Data de Término da vigência: 03 de janeiro de 2016
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Roberto Sartori Filho
• Beneficiário: José de Oliveira Carvalho Neto
• Instituição Sede: Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
• Assunto(s): Fertilidade Espermatozoides Biotecnologia da reprodução
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ambiente uterino | Espermatozóide | fertilidade | sexagem espermática | Biotecnologia da reprodução

Resumo

Embora estudos in vivo em camundongos tenham identificado que a ligação dos espermatozoides às células da tuba uterina (CTU) cause uma alteração nos níveis de transcrição e secreção de proteínas das CTU, não há estudos in vivo em bovinos demonstrando este efeito. Além disto, devido à alteração da ligação dos espermatozoides sexados ou de espermatozoides X ou Y a estas células, é possível que a transcrição e secreção de proteínas pelas CTU seja modificada, comprometendo a formação do ambiente tubárico quando se utiliza sêmen sexado ou espermatozoides X ou Y na IA. Portanto os objetivos deste estudo são avaliar o efeito dos espermatozoides sexados e não sexados no transcriptoma das CTU e no proteoma do fluido tubárico e validar um modelo in vitro para estudar essas alterações. Para isto, um ejaculado de touros Nelore (n=4) será separado em três frações: não sexado (NS), sexado X (X) e sexado Y (Y). Um quarto grupo será formado pelo pool de espermatozoides sexado X e Y (XY), além do grupo controle, em que será utilizado apenas meio de congelamento, sem espermatozoides. Este sêmen será utilizado na inseminação artificial (IA) de 75 novilhas, divididas em 3 réplicas com 5 animais por grupo em cada réplica. Dezoito horas após IA, os animais serão abatidos para retirada das tubas uterinas. Após a dissecção, o interior de cada tuba será lavado para retirada das células epiteliais e do fluido que ocupa o lúmem da tuba. O lavado será centrifugado para separação das células e do fluido. As células de cada grupo serão utilizadas para avaliação do transcriptoma das CTU pela técnica de RNA-Seq, enquanto o fluido será utilizado na avaliação do perfil proteico do fluido da tuba uterina pela técnica de 2D nanoUPLC-HDMSE. Dos dados obtidos no transcriptoma, serão selecionados aproximadamente dezesseis genes diferencialmente expressos entre o grupo controle e os inseminados com sêmen não sexado para serem utilizados na validação de um modelo in vitro para estudos de alterações na tuba uterina causado pelos espermatozoides. Tubas uterinas coletadas em abatedouro serão inseminadas in vitro com espermatozoides em diferentes concentrações espermáticas e por diferentes tempos de incubação. As CTU serão então coletadas e a expressão dos genes selecionados será quantificada por PCR em tempo real. Este trabalho pode fornecer informações importantes das características fisiológicas necessárias para fecundação in vivo, além de informações relacionadas a diferenças no estímulo do ambiente da tuba uterina causada pelo processo de sexagem espermática.