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Produção e caracterização de células multipotentes e pluripontentes induzidas em Blastocerus dichotomus

Processo: 13/13972-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de outubro de 2013
Vigência (Término): 28 de fevereiro de 2017
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:José Maurício Barbanti Duarte
Beneficiário:Luciana Diniz Rola
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):14/02439-2 - Produção e caracterização de células multipotentes e PLURIPONTENTES induzidas em Blastocerus dichotomus, BE.EP.DR
Assunto(s):Células-tronco multipotentes   Tecido adiposo   Células-tronco pluripotentes induzidas   Polpa dentária

Resumo

A criopreservação de gametas e embriões é de extrema importância para a manutenção de diversidade genética em pequenas populações selvagens, porém estes materiais são de difícil obtenção. Estudos realizados com células-tronco pluripotentes induzidas (iPS) humanas e de camundongo mostraram-se capazes de se diferenciar em células germinais, espermatozoides e oócitos. Estudos sobre iPS em cervídeos são inéditos, logo temos como enfoque neste projeto estabelecer protocolos para a obtenção de linhagens iPS estáveis na espécie Blastocerus dichotomus para produzir gametas viáveis no futuro. A reprogramação de células somáticas em células iPS é facilitado pelo uso de células-tronco adultas e, como pouco se conhece a respeito de células-tronco multipotentes em cervídeos, a primeira fase do projeto tem como objetivo obter biopsias de diversos tecidos (adiposo, polpa dentária, botão do chifre), que serão comparadas com linhas celulares unipotentes oriundas de biopsias de pele (controle negativo). Será avaliada a viabilidade das células com azul de tripan, e marcadores de células mesenquimais serão avaliados por meio de RT-qPCR. Posteriormente, estes tecidos serão criopreservadas e sua viabilidade testada na pós-descongelação. A segunda fase terá como enfoque a derivação de células iPS a partir das linhagens multipotentes da fase anterior, que será conduzida por meio de transdução gênica utilizando-se a ferramenta PiggyBac. Os cultivos para derivação das iPS serão feitos em presença de fibroblasto fetais de camundongo (MEF) bloqueados pela mitomicina, e as colônias selecionadas serão repicadas para manter linhagens para posterior caracterização por meio de testes imunocitoquímicos, RT-qPCR, atividade da fosfatase alcalina, corante lacZ, cariótipo, capacidade de formar corpos embrióides in vitro, diferenciação em células da linhagem germinativa de fêmeas, avaliação de marcadores dos tecidos oriundos dos três folhetos embrionários, e diferenciação in vitro em camundongos imunosuprimidos para avaliar a formação do três folhetos embrionários.

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
BUZANSKAS, MARCOS ELI; GROSSI, DANIELA DO AMARAL; VENTURA, RICARDO VIEIRA; SCHENKEL, FLAVIO SCHRAMM; SELEGUIM CHUD, TATIANE CRISTINA; STAFUZZA, NEDENIA BONVINO; ROLA, LUCIANA DINIZ; CONCEICAO MEIRELLES, SARAH LAGUNA; MOKRY, FABIANA BARICHELLO; MUDADU, MAURICIO DE ALVARENGA; HIGA, ROBERTO HIROSHI; GUALBERTO BARBOSA DA SILVA, MARCOS VINICIUS; DE ALENCAR, MAURICIO MELLO; DE ALMEIDA REGITANO, LUCIANA CORREIA; MUNARI, DANISIO PRADO. Candidate genes for male and female reproductive traits in Canchim beef cattle. JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY, v. 8, AUG 23 2017. Citações Web of Science: 6.
BUZANSKAS, M. E.; PIRES, P. S.; CHUD, T. C. S.; BERNARDES, P. A.; ROLA, L. D.; SAVEGNAGO, R. P.; LOBO, R. B.; MUNARI, D. P. Parameter estimates for reproductive and carcass traits in Nelore beef cattle. Theriogenology, v. 92, p. 204-209, APR 1 2017. Citações Web of Science: 10.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
ROLA, Luciana Diniz. Produção e caracterização de células multipotentes e pluripotentes induzidas em Blastocerus dichotomus. 2017. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias..

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