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Efeitos do aumento da expressão do gene Cx43 em células pulmonares neoplásicas transformadas pelo carcinógeno do tabaco: estudos in vitro e in vivo

Processo: 13/17108-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de janeiro de 2014
Vigência (Término): 30 de abril de 2016
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Patologia Animal
Pesquisador responsável:Maria Lucia Zaidan Dagli
Beneficiário:Lucas Martins Chaible
Instituição-sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):14/19222-6 - Papel das conexinas durante o desenvolvimento dos tumores mamários: estudo in vivo por meio de modelo murino tri-transgênico e in vitro por meio do cultivo 3D de suas células, BE.EP.PD
Assunto(s):Oncologia   Transformação celular neoplásica   Conexinas   Modelos animais   Biologia molecular

Resumo

As neoplasias pulmonares são uma das grandes causas de morte na sociedade moderna, responsável por mais de 10 milhões de mortes por ano no mundo, sendo a incidência dessa doença esta diretamente relacionada com os hábitos do dia-a-dia, entre ele o hábito de fumar. O tabaco presente nos cigarros possui dezenas de carcinógenos conhecidos, entre eles o NNK (4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone) é o mais importante. Esse carcinógeno é responsável pela formação de adutos de DNA e consequente mutações genéticas causadoras dos clones neoplásicos. Células pulmonares E10 expostas ao NNK apresentaram maior índice proliferativo, maior índice migratório, maior capacidade de realizar metástases e redução da comunicação intercelular mediada pela proteína Cx43. Essa redução na comunicação intercelular vem sido correlacionada com a maior malignidade de tumores devido clones tumorais não serem suprimidos pelo microambiente que os cercam. Nesse trabalho, visamos observar se o aumento da expressão do gene Cx43 causa a restauração da comunicação intercelular e por consequência a alteração nas características de malignidade de células neoplásicas. Para isso, utilizaremos células pulmonares transformadas pelo carcinógeno NNK, células chamadas E10-NNK20, onde reestabeleceremos a comunicação celular por meio da transfecção de um sistema de expressão gênica induzível pela droga doxiciclina (TetON-Cx43). Na presença desse antibiótico o sistema é ativado e o gene Cx43 é expresso, sua expressão é desativada com a retirada da droga. Esse projeto está dividido em três diferentes etapas organizadas numa sequência lógica de conhecimento e complexidade. A primeira etapa será realizada in vitro para verificarmos as alterações fenotípicas causadas pelo restabelecimento da comunicação celular, esses resultados serão comparados com os resultados já conhecidos como comportamentos normais dessa linhagem obtidos anteriormente por nosso grupo; a segunda etapa será a padronização in vivo do sistema de expressão TetON-Cx43 para verificar o efeito dose/resposta da droga e para observar o comportamento da ativação do gene Cx43 in vivo; na terceira etapa, transplantaremos em camundongos as células E10-NNK20 transfectadas pelo sistema TetON-Cx43, e avaliar o impacto do restabelecimento da comunicação celular nos índices de malignização, infiltração e sobrevida em camundongos. Nessa proposta o bolsista dará continuidade ao seu trabalho realizado no doutorado, e também seguirá obtendo novos dados muito importantes para o andamento do laboratório de Oncologia Experimental da FMVZ - USP