Bolsa 13/14278-0 - Microbiologia, Tabagismo - BV FAPESP
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Detecção e quantificação de patógenos periodontais na microbiota subgengival de fumantes e não fumantes

Processo: 13/14278-0
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2013
Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2014
Área de conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia - Periodontia
Pesquisador responsável:Cláudio Mendes Pannuti
Beneficiário:Gabriela Elsbeth Bitiati Schwab
Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FO). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Microbiologia   Tabagismo   Hábito de fumar   Placa bacteriana   Patógenos   Reação em cadeia da polimerase em tempo real   Inquéritos e questionários   Estudos transversais
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Microbiologia | Patógenos periodontais | Tabagismo | Periodontia

Resumo

Será conduzido um estudo transversal com objetivo de comparar fumantes e não fumantes em relação a presença e quantidade de patogenos periodontais subgengivais. Serão recrutados 30 fumantes e 30 não-fumantes com periodontite crônica que preencherem os critérios de elegibilidade, oriundos dos mesmos serviços de atendimento ambulatorial na FOUSP. Os sujeitos serão pareados em relação à sexo, idade (+ 5 anos) e profundidade clínica de sondagem do sítio de coleta (+1mm). Após a triagem e inclusão dos sujeitos da pesquisa, os mesmos receberão exame periodontal completo e preencherão questionário estruturado para registro de dados demográficos e dados relacionados ao tabagismo. Tabagismo será validado pelos níveis de monóxido de carbono expirado. O exame microbiológico será feito a partir de um pool de quatro amostras de placa bacteriana subgengival coletadas das bolsas periodontais de maior profundidade de sondagem. Os tubos contendo o pool de amostras serão estocados à -20°C até a extração de DNA bacteriano. As amostras de placa serão submetidas à extração de DNA bacteriano, e quantificadas através da reação em cadeia pela polimerase em tempo real (PCR em tempo real). Serão avaliadas a quantidade subgengival de Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola e Aggregatibacter actinomycetencomitans. O conjunto de reagentes QIAamp® DNA mini kit será utilizado para a extração do DNA presente nas amostras clínicas. A identificação e quantificação das bactérias alvo no material genético extraído das amostras de placa subgengival serão realizadas pela PCR em tempo real utilizando o sistema Taqman® com detecção pela ABI PRISM Fast Sequence Detection System. Os iniciadores e as sondas que serão escolhidos foram desenhados baseados nas regiões espécie-específicas altamente conservadas do gene 16S rRNA, através do uso do programa Primer ExpressTM e suas especificidades foram confirmadas empregando-se o programa BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) do National Center for Biotechnology Information Sever (http://ncbi.nlm.nih.gov/blast/). As diluições seriadas das cópias dos plasmídeos servirão como controle positivo para as reações de amplificação, e como controle negativo o DNA será substituído pela mesma quantidade de água estéril. Todas as amostras clínicas serão processadas pela PCR em tempo real juntamente com a curva padrão respectiva de cada espécie bacteriana, em triplicatas. Os fumantes e não fumantes serão comparados entre si com relação à presença e quantidade dos patogenos periodontais. (AU)

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