Adaptação e desenvolvimento de um modelo experimental para estudos da inflamação em Danio rerio (zebrafish)

• Processo: 13/25971-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2014
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Patologia Animal
• Pesquisador responsável: Marco Antonio de Andrade Belo
• Beneficiário: Melque Ferrari de Oliveira
• Instituição Sede: Universidade Camilo Castelo Branco (UNICASTELO). Campus Descalvado. Descalvado , SP, Brasil
• Assunto(s): Doenças dos animais Fisiopatologia Inflamação aguda Resposta inflamatória Microscopia Modelo experimental Peixe-zebra Danio rerio
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: inflamação aguda | Zebrafish | Inflamação aguda

Resumo

Síntese da Proposta de Trabalho este estudo tem por objetivo adaptar e desenvolver um protocolo experimental para o estudo da reação inflamatória aguda em Danio rerio ("zebrafish"), através de aerocistite induzida pela inoculação de Aeromonas hydrophila. Serão utilizados 60 zebrafish (Danio rerio), provenientes da mesma desova, que serão acondicionados em 6 aquários (n=10), com capacidade de 100L de água cada, abastecidos com água corrente desprovida de cloro. Após período de aclimatação de 15 dias, os peixes serão anestesiados em solução aquosa de benzocaína (1:10.000) para administração do inóculo de 10¼L de A. hydrophila viva na bexiga natatória na concentração 3 x 109 UFC. Seis, 12, 18, 24, 36 e 48 horas após a inoculação, a eutanásia de dez peixes por período será realizada por anestesia profunda em solução aquosa de benzocaína (1:500). A bexiga natatória será lavada cuidadosamente com PBS, contendo EDTA a 0,09% para coleta do exsudato e uma alíquota desse volume será transferida para câmara de Neubauer para contagem das células inflamatórias totais em microscopia de luz. Para a contagem diferencial de trombócitos, linfócitos, macrófagos e granulócitos será colocada uma pequena aliquota deste exsudato sobre uma lâmina histológica para realização de extensão, para posterior fixação com corante May-Grunwald-Giemsa-Wrigth. Apesar de nosso laboratório ter experiência na técnica com outros teleósteos como o pacu (Piaractus mesopotamicus) e a tilápia (Oreochromis niloticus), a administração do micro-inóculo na bexiga natatória pelo pequeno tamanho do zebrafish, a padronização dos procedimentos de anestesia e a determinação da cinética de resposta celular no foco inflamado nos seis períodos propostos representam o desafio desta etapa de trabalho. Pois entre as espécies de teleósteos supracitadas, muita diferença foi observada na evolução da resposta inflamatória. Contudo, o domínio desta técnica no Denio rerio representará no futuro uma importante ferramenta no estudo de mediadores e moduladores, assim como, na compreensão e elucidação de mecanismos fisiopatológicos presentes na reação inflamatória aguda.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

CHARLIE-SILVA, IVES; FEITOSA, NATALIA MARTINS; MENDONCA GOMES, JULIANA MOREIRA; DE MELO HOYOS, DANIELA CHEMIM; MATTIOLI, CRISTIANO CAMPOS; ETO, SILAS FERNANDES; FERNANDES, DAYANNE CARLA; DE ANDRADE BELO, MARCO ANTONIO; SILVA, JULIANA DE OLIVEIRA; BRANCO DE BARROS, ANDRE LUIS; et al. Potential of mucoadhesive nanocapsules in drug release and toxicology in zebrafish. PLoS One, v. 15, n. 9, SEP 24 2020. (19/19939-1, 13/25971-9, 18/07098-0)

BELO, MARCO A. A.; OLIVEIRA, MELQUE F.; OLIVEIRA, SUSANA L.; ARACATI, MAYUMI F.; RODRIGUES, LETICIA F.; COSTA, CAMILA C.; CONDE, GABRIEL; GOMES, JULIANA M. M.; PRATA, MARIANA N. L.; BARRA, AYSLAN; et al. Zebrafish as a model to study inflammation: A tool for drug discovery. BIOMEDICINE & PHARMACOTHERAPY, v. 144, DEC 2021. (13/25971-9, 19/19939-1, 18/07098-0)

CHARLIE-SILVA, IVES; FEITOSA, NATALIA M.; PONTES, LETICIA G.; FERNANDES, BIANCA H.; NOBREGA, RAFAEL H.; GOMES, JULIANA M. M.; PRATA, MARIANA N. L.; FERRARIS, FAUSTO K.; MELO, DANIELA C.; CONDE, GABRIEL; et al. Plasma proteome responses in zebrafish following lambda-carrageenan-Induced inflammation are mediated by PMN leukocytes and correlate highly with their human counterparts. FRONTIERS IN IMMUNOLOGY, v. 13, p. 21-pg., 2022-09-29. (13/25971-9, 19/19939-1)