Isolamento e caracterização de Lactobacillus spp. da cavidade bucal e sua ação probiótica sob Candida albicans: formação de biofilme, infecção em modelos de invertebrados e expressão dos genes EFG1, HWP1 e ALS1

• Processo: 13/25181-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2017
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Juliana Campos Junqueira
• Beneficiário: Rodnei Dennis Rossoni
• Instituição Sede: Instituto de Ciência e Tecnologia (ICT). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José dos Campos. São José dos Campos , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 14/12458-4 - Ação probiótica de Lactobacillus spp. na infecção por Candida albicans: estudo em modelos hospedeiros de invertebrados, BE.EP.DR
• Assunto(s): Caenorhabditis elegans Candida albicans Galleria mellonella Lactobacillus Saliva Probióticos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Caenorhabditis elegans | Cândida Albicans | Expressão de genes | Galleria mellonella | Lactobacillus | probiótico | Microbiologia Bucal

Resumo

O objetivo desse estudo será isolar e identificar cepas de Lactobacillus spp. da cavidade bucal de indivíduos livres de cárie e avaliar sua ação probiótica sob Candida albicans por meio de estudos in vitro e in vivo. Amostras de saliva serão semeadas em ágar MRS e as colônias isoladas serão identificadas pelo sistema API50CHL e confirmadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Primeiramente, serão avaliados os efeitos de todas as cepas identificadas como Lactobacillus sobre a formação de biofilme e capacidade de filamentação de C. albicans in vitro. Serão avaliados os efeitos diretos das células de Lactobacillus sobre C. albicans e também os efeitos indiretos, utilizando apenas o sobrenadante da cultura. Os biofilmes mistos serão formados em fundo de placas de 96 poços por 48 horas e quantificados pela contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Os ensaios de filamentação de C. albicans serão realizados em placas de cultura de células de 24 poços e analisados por microscopia óptica. A seguir, serão selecionadas 10 cepas que apresentarem melhor ação inibitória sobre C. albicans para a realização dos demais ensaios. Para estudo in vivo, as cepas de Lactobacillus serão inoculadas juntamente com C. albicans em modelos hospedeiros de infecção experimental (Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans). No modelo de G. mellonella, a infecção experimental será avaliada pela curva de sobrevivência, quantificação da carga fúngica na hemolinfa, densidade hemocitária e quantificação da melanização dos animais estudados. No modelo de C. elegans, a infecção será avaliada por meio dos ensaios de curva de sobrevivência, contagem de UFC/mL no trato intestinal dos nemátodos e estudo da filamentação de C. albicans. Além disso, será realizada a quantificação da expressão dos genes EFG1, HWP1 e ALS1 de C. albicans em biofilmes monotípicos e heterotípicos com Lactobacillus formados in vitro por 48 horas, utilizando o ensaio de PCR em Tempo Real (qPCR). Os resultados serão submetidos a uma análise exploratória para a seleção do teste estatístico mais adequado para cada experimento desse estudo. O nível de significância considerado de cada teste será de 5%. (AU)

Publicações científicas

(7)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

RODNEI DENNIS ROSSONI; PATRÍCIA PIMENTEL DE BARROS; FERNANDA FREIRE; JÉSSICA DIANE DOS SANTOS; ANTONIO OLAVO CARDOSO JORGE; JULIANA CAMPOS JUNQUEIRA. Study of Microbial Interaction Formed by "Candida krusei" and "Candida glabrata": "In Vitro" and "In Vivo" Studies. Brazilian Dental Journal, v. 28, n. 6, p. 669-674, 2017-12-00. (13/25181-8, 12/02184-9)

ROSSONI, RODNEI DENNIS; FUCHS, BETH BURGWYN; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS; MYLONAKIS, ELEFTHERIOS. Lactobacillus paracasei modulates the immune system of Galleria mellonella and protects against Candida albicans infection. PLoS One, v. 12, n. 3, MAR 7 2017. (14/12458-4, 13/25181-8, 15/09770-9)

DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; SCORZONI, LILIANA; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; DE OLIVEIRA FUGISAKI, LUCIANA RUANO; FUCHS, BETH BURGWYN; MYLONAKIS, ELEFTHERIOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS; ROSSONI, RODNEI DENNIS. Lactobacillus paracasei 28.4 reduces in vitro hyphae formation of Candida albicans and prevents the filamentation in an experimental model of Caenorhabditis elegans. Microbial Pathogenesis, v. 117, p. 80-87, APR 2018. (15/09770-9, 13/25181-8, 14/12458-4)

DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; ROSSONI, RODNEI DENNIS; FREIRE, FERNANDA; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; DAS CHAGAS LOPES, LUCAS ALEXANDRE; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO. Candida tropicalis affects the virulence profile of Candida albicans: an in vitro and in vivo study. PATHOGENS AND DISEASE, v. 76, n. 2, MAR 2018. (13/25181-8, 15/09770-9, 12/15250-0)

ROSSONI, RODNEI DENNIS; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; ALVES FIGUEIREDO, LIVIA MARA; MARTINS, CAROLINA PISTILLE; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Clinical strains of Lactobacillus reduce the filamentation of Candida albicans and protect Galleria mellonella against experimental candidiasis. Folia Microbiologica, v. 63, n. 3, p. 307-314, MAY 2018. (15/09770-9, 13/25181-8)

ROSSONI, RODNEI DENNIS; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; DE ALVARENGA, JANAINA ARAUJO; DOS SANTOS, JESSICA DIANE; CHIPOLETTI DOS SANTOS PRADO, ANA CAROLINA; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; ANBINDER, ANA LIA; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Inhibitory effect of probiotic Lactobacillus supernatants from the oral cavity on Streptococcus mutans biofilms. Microbial Pathogenesis, v. 123, p. 361-367, OCT 2018. (14/11841-9, 13/25181-8, 17/19219-3, 15/09770-9)

ROSSONI, RODNEI DENNIS; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; DE ALVARENGA, JANAINA ARAUJO; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; FUCHS, BETH BURGWYN; MYLONAKIS, ELEFTHERIOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Antifungal activity of clinical Lactobacillus strains against Candida albicans biofilms: identification of potential probiotic candidates to prevent oral candidiasis. BIOFOULING, v. 34, n. 2, p. 212-225, 2018. (13/26820-4, 15/09770-9, 13/25181-8)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

ROSSONI, Rodnei Dennis. Isolamento e caraterização de Lactobacillus spp. da cavidade bucal e sua ação probiótica sob Candida albicans: formação de biofilme, infecção em modelos de invertebrados e expressão dos genes EFG1, HWP1 e ALS1. 2017. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Ciência e Tecnologia. São José dos Campos São José dos Campos.