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Isolamento e caracterização de Lactobacillus spp. da cavidade bucal e sua ação probiótica sob Candida albicans: formação de biofilme, infecção em modelos de invertebrados e expressão dos genes EFG1, HWP1 e ALS1

Processo: 13/25181-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de março de 2014
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2017
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia
Pesquisador responsável:Juliana Campos Junqueira
Beneficiário:Rodnei Dennis Rossoni
Instituição-sede: Instituto de Ciência e Tecnologia (ICT). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José dos Campos. São José dos Campos , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):14/12458-4 - Ação probiótica de Lactobacillus spp. na infecção por Candida albicans: estudo em modelos hospedeiros de invertebrados, BE.EP.DR
Assunto(s):Caenorhabditis elegans   Candida albicans   Galleria mellonella   Lactobacillus   Saliva   Probióticos

Resumo

O objetivo desse estudo será isolar e identificar cepas de Lactobacillus spp. da cavidade bucal de indivíduos livres de cárie e avaliar sua ação probiótica sob Candida albicans por meio de estudos in vitro e in vivo. Amostras de saliva serão semeadas em ágar MRS e as colônias isoladas serão identificadas pelo sistema API50CHL e confirmadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Primeiramente, serão avaliados os efeitos de todas as cepas identificadas como Lactobacillus sobre a formação de biofilme e capacidade de filamentação de C. albicans in vitro. Serão avaliados os efeitos diretos das células de Lactobacillus sobre C. albicans e também os efeitos indiretos, utilizando apenas o sobrenadante da cultura. Os biofilmes mistos serão formados em fundo de placas de 96 poços por 48 horas e quantificados pela contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Os ensaios de filamentação de C. albicans serão realizados em placas de cultura de células de 24 poços e analisados por microscopia óptica. A seguir, serão selecionadas 10 cepas que apresentarem melhor ação inibitória sobre C. albicans para a realização dos demais ensaios. Para estudo in vivo, as cepas de Lactobacillus serão inoculadas juntamente com C. albicans em modelos hospedeiros de infecção experimental (Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans). No modelo de G. mellonella, a infecção experimental será avaliada pela curva de sobrevivência, quantificação da carga fúngica na hemolinfa, densidade hemocitária e quantificação da melanização dos animais estudados. No modelo de C. elegans, a infecção será avaliada por meio dos ensaios de curva de sobrevivência, contagem de UFC/mL no trato intestinal dos nemátodos e estudo da filamentação de C. albicans. Além disso, será realizada a quantificação da expressão dos genes EFG1, HWP1 e ALS1 de C. albicans em biofilmes monotípicos e heterotípicos com Lactobacillus formados in vitro por 48 horas, utilizando o ensaio de PCR em Tempo Real (qPCR). Os resultados serão submetidos a uma análise exploratória para a seleção do teste estatístico mais adequado para cada experimento desse estudo. O nível de significância considerado de cada teste será de 5%. (AU)

Publicações científicas (7)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
ROSSONI, RODNEI DENNIS; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; DE ALVARENGA, JANAINA ARAUJO; DOS SANTOS, JESSICA DIANE; CHIPOLETTI DOS SANTOS PRADO, ANA CAROLINA; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; ANBINDER, ANA LIA; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Inhibitory effect of probiotic Lactobacillus supernatants from the oral cavity on Streptococcus mutans biofilms. Microbial Pathogenesis, v. 123, p. 361-367, OCT 2018. Citações Web of Science: 1.
ROSSONI, RODNEI DENNIS; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; ALVES FIGUEIREDO, LIVIA MARA; MARTINS, CAROLINA PISTILLE; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Clinical strains of Lactobacillus reduce the filamentation of Candida albicans and protect Galleria mellonella against experimental candidiasis. Folia Microbiologica, v. 63, n. 3, p. 307-314, MAY 2018. Citações Web of Science: 7.
DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; SCORZONI, LILIANA; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; DE OLIVEIRA FUGISAKI, LUCIANA RUANO; FUCHS, BETH BURGWYN; MYLONAKIS, ELEFTHERIOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS; ROSSONI, RODNEI DENNIS. Lactobacillus paracasei 28.4 reduces in vitro hyphae formation of Candida albicans and prevents the filamentation in an experimental model of Caenorhabditis elegans. Microbial Pathogenesis, v. 117, p. 80-87, APR 2018. Citações Web of Science: 4.
DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; ROSSONI, RODNEI DENNIS; FREIRE, FERNANDA; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; DAS CHAGAS LOPES, LUCAS ALEXANDRE; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO. Candida tropicalis affects the virulence profile of Candida albicans: an in vitro and in vivo study. PATHOGENS AND DISEASE, v. 76, n. 2 MAR 2018. Citações Web of Science: 3.
ROSSONI, RODNEI DENNIS; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; DE ALVARENGA, JANAINA ARAUJO; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; FUCHS, BETH BURGWYN; MYLONAKIS, ELEFTHERIOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Antifungal activity of clinical Lactobacillus strains against Candida albicans biofilms: identification of potential probiotic candidates to prevent oral candidiasis. BIOFOULING, v. 34, n. 2, p. 212-225, 2018. Citações Web of Science: 11.
ROSSONI, RODNEI DENNIS; FUCHS, BETH BURGWYN; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS; MYLONAKIS, ELEFTHERIOS. Lactobacillus paracasei modulates the immune system of Galleria mellonella and protects against Candida albicans infection. PLoS One, v. 12, n. 3 MAR 7 2017. Citações Web of Science: 20.
RODNEI DENNIS ROSSONI; PATRÍCIA PIMENTEL DE BARROS; FERNANDA FREIRE; JÉSSICA DIANE DOS SANTOS; ANTONIO OLAVO CARDOSO JORGE; JULIANA CAMPOS JUNQUEIRA. Study of Microbial Interaction Formed by "Candida krusei" and "Candida glabrata": "In Vitro" and "In Vivo" Studies. Brazilian Dental Journal, v. 28, n. 6, p. -, Dez. 2017.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
ROSSONI, Rodnei Dennis. Isolamento e caraterização de Lactobacillus spp. da cavidade bucal e sua ação probiótica sob Candida albicans : formação de biofilme, infecção em modelos de invertebrados e expressão dos genes EFG1, HWP1 e ALS1. 2017. 101 f. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista "Julio de Mesquita Filho" Instituto de Ciência e Tecnologia (Campus de São José dos Campos)..

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