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Doença renal policística: sinais químicos da policistina 1 (PC1) atraem os monócitos para os cistos renais estimulando seu crescimento e contribuindo para a deterioração da função renal

Processo: 13/16376-0
Linha de fomento:Bolsas no Exterior - Pesquisa
Vigência (Início): 01 de julho de 2014
Vigência (Término): 30 de junho de 2015
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina
Pesquisador responsável:Marcelo Ferreira Cassini
Beneficiário:Marcelo Ferreira Cassini
Anfitrião: Lloyd Garnet Cantley
Instituição-sede: Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da USP (HCMRP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Local de pesquisa: Yale University, Estados Unidos  
Assunto(s):Nefrologia   Urologia   Transplante de rim   Insuficiência renal crônica

Resumo

Introdução: A doença renal policística é uma das doenças genéticas mais comuns em humanos, afetando mais de 500 mil pessoas nos Estados Unidos. É caracterizada por um crescimento progressivo de cistos renais que conduzem à doença renal terminal, em ~ 50% dos pacientes. Policistina-1 (CP1) e policistina-2 (PC2) são os produtos proteicos dos genes PKD1 e PKD2, respectivamente. A deleção de Pkd1 ou PKD2 em ratos adultos resulta no crescimento lento dos cistos, a menos que haja um estímulo sobreposto para a proliferação de células tubulares, como lesão renal aguda. Assim, a taxa de crescimento do cisto não pode ser determinado apenas pelo aumento autónomo célula em proliferação, que ocorre na ausência de policistinas, mas deve também ser regulada por sinais externos desconhecidos. Foi encontrado que a proliferação celular tubular durante a fase de reparação de lesão renal é estimulada por macrófagos ativados alternativamente, que circundam os túbulos transitoriamente. Os macrófagos quando esgotados em todo o animal, diminuem substancialmente a proliferação das células de revestimento dos cistos, fato que diminui a velocidade de crescimento dos cistos renais. Este achado foi replicado em outros modelos experimentais e ampliado para mostrar que os rins de pacientes com exposição a grande número de macrófagos ativados podem promover a proliferação de células derivadas de cistos, in vitro. Por isso, acredita-se que os macrófagos estejam fornecendo sinais externos que aceleram o crescimento do cisto na doença renal policística, que e os fatores derivados de macrófagos promovam a progressão da doença, representando assim, uma nova área de foco das pesquisas que irão identificar alvos terapêuticos para retardar a perda da função renal. Objetivos: Identificar o mecanismo que promove o direcionamento dos macrófagos aos rins císticos e, em seguida, gerar modelos de deleção para interromper os sinais, a fim de definir a abordagem mais eficaz para se evitar o acúmulo de macrófagos e o crescimento dos cistos. Material e Métodos: Modelos animais: Nós vamos usar ratos Pkd1fl/fl que serão cruzados com PKHD1-Cre ratos para mediar a exclusão específica dos rins do alelo Pkd1. A supressão será confirmada por análise de PCR padrão genotípico. Pkd1fl/fl; neonatos PKHD1-Cre serão utilizados para as experiências. Todos os experimentos envolvendo ratos serão conduzidos de acordo com Yale University Animal Care Institucional e Comitê de Uso Diretrizes e Procedimentos. Esgotamento dos Macrófagos: 400¼ls/20g de peso corporal de uma suspensão lipossomal contendo quer clodronato ou soro fisiológico serão administradas em ratos com 10 dias de vida, por injecção intraperitoneal em dias alternados. Ensaio de migração de macrófagos: macrófagos inativos serão usados sobre o topo das câmaras de placas de 6 poços Transwell e deixadas a reagirem durante a noite. No dia seguinte, o meio foi substituído com DMEM-F12. As partes inferiores dos filtros Transwell serão então esfregadas com um Q-tip para remover quaisquer macrófagos que podem ter migrado. Os fundos dos poços serão então preenchidos com soro DMEM/F12, DMEM/F12 10% FBS, meios condicionados Pkd1fl/- ou Pkd1-/-. As placas serão incubadas a 37 ° C durante 12 h, e suas partes superiors, em seguida, serão limpas com um Q-tip para remover os macrófagos que não tinham migrado através da membrana. Os poços serão então fixado em 4% de formaldeído à temperatura ambiente durante 15 min, seguido por coloração em eosina / hematoxilina sendo feita a contagem usando um microscópio. Vinte campos aleatórios serão contados com magnificação de 20x. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
CASSINI, MARCELO F.; KAKADE, VIJAYAKUMAR R.; KURTZ, ELIZABETH; SULKOWSKI, PARKER; GLAZER, PETER; TORRES, RICHARD; SOMLO, STEFAN; CANTLEY, LLOYD G. Mcp1 Promotes Macrophage-Dependent Cyst Expansion in Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease. JOURNAL OF THE AMERICAN SOCIETY OF NEPHROLOGY, v. 29, n. 10, p. 2471-2481, OCT 2018. Citações Web of Science: 7.

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