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Secreção de glicoproteínas heterólogas em Aspergillus: efeito do padrão de glicosilação em parâmetros funcionais de glicosil hidrolases

Processo: 13/24988-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de janeiro de 2014
Vigência (Término): 30 de junho de 2018
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
Pesquisador responsável:André Ricardo de Lima Damasio
Beneficiário:Marcelo Ventura Rubio
Instituição-sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:12/20549-4 - Secreção de glicoproteínas heterólogas em Aspergillus: efeito do padrão de glicosilação em parâmetros funcionais de glicosil hidrolases, AP.BIOEN.JP
Assunto(s):Enzimas   Glicoproteínas   Glicosídeo hidrolases   Aspergillus   Glicosilação

Resumo

Apenas um terço da biomassa de cana-de-açúcar é processada a etanol, enquanto os outros dois terços são descartados como bagaço e palha. Celulose e hemicelulose são os polímeros mais abundantes no bagaço de cana, e estão organizados de forma muito complexa na parede celular. Celulases e hemicelulases são glicosil hidrolases responsáveis pela completa degradação dos polissacarídeos da parede celular de plantas. A maior fonte de prospecção para produção de enzimas relacionadas a degradação de biomassa são os fungos filamentosos, destacando-se os do gênero Aspergillus. Aspergillus e Trichoderma, são extraordinários em sua capacidade de secretar grandes quantidades de proteínas para o meio de cultura. A maioria das proteínas fúngicas sofre glicosilação co- ou pós-traducional no reticulo endoplasmático (RE) e/ou complexo de Golgi, e, portanto, são glicoproteínas em sua essência. Contudo, esta proposta versará sobre dois grandes objetivos: 1) efeito de N-glicanas sobre propriedades funcionais de glicosil hidrolases: investigaremos possíveis alterações funcionais de variantes não glicosiladas, hipo- e hiper-glicosiladas de uma endo-xilanase GH11 clonada de Penicillium funiculosum. Estas alterações incluem, aumento ou redução de atividade, alteração no padrão de produtos de hidrólise, mudanças em constantes cinéticas (Km e Kcat), alterações na estrutura secundária e variações na especificidade e afinidade a diferentes substratos; 2) expressão constitutiva de hacA induzido e cpcA (genes envolvidos no stress de RE e unfolded protein response) em A. nidulans: propomos a construção de cepas expressando constitutivamente hacAi e gcn4p/cpcA, verificando de forma sistemática a produção heteróloga de uma proteína alvo, XegA de Aspergillus clavatus (Acla_029940). (AU)

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
RUBIO, MARCELO VENTURA; FANCHINI TERRASAN, CESAR RAFAEL; CONTESINI, FABIANO JARES; ZUBIETA, MARIANE PALUDETTI; GERHARDT, JAQUELINE ALINE; OLIVEIRA, LEANDRO CRISTANTE; DE SOUZA SCHMIDT GONCALVES, ANY ELISA; ALMEIDA, FAUSTO; SMITH, BRADLEY JOSEPH; MARTINS FERREIRA DE SOUZA, GUSTAVO HENRIQUE; SAMPAIO DIAS, ARTUR HERMANO; SKAF, MUNIR; DAMASIO, ANDRE. Redesigning N-glycosylation sites in a GH3 beta-xylosidase improves the enzymatic efficiency. BIOTECHNOLOGY FOR BIOFUELS, v. 12, n. 1 NOV 14 2019. Citações Web of Science: 0.
CONTESINI, FABIANO JARES; LIBERATO, MARCELO VIZONA; RUBIO, MARCELO VENTURA; CALZADO, FELIPE; ZUBIETA, MARIANE PALUDETTI; RIANO-PACHON, DIEGO MAURICIO; SQUINA, FABIO MARCIO; BRACHT, FABRICIO; SKAF, MUNIR S.; DAMASIO, ANDRE RICARDO. Structural and functional characterization of a highly secreted alpha-L-arabinofuranosidase (GH62) from Aspergillus nidulans grown on sugarcane bagasse. BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-PROTEINS AND PROTEOMICS, v. 1865, n. 12, p. 1758-1769, DEC 2017. Citações Web of Science: 4.
CALZADO, FELIPE; PRATES, ERICA T.; GONCALVES, THIAGO A.; RUBIO, MARCELO V.; ZUBIETA, MARIANE P.; SQUINA, FABIO M.; SKAF, MUNIR S.; DAMASIO, ANDRE R. L. Molecular basis of substrate recognition and specificity revealed in family 12 glycoside hydrolases. Biotechnology and Bioengineering, v. 113, n. 12, p. 2577-2586, DEC 2016. Citações Web of Science: 5.
RUBIO, MARCELO VENTURA; ZUBIETA, MARIANE PALUDETTI; LOURENO FRANCO CAIRO, JOAO PAULO; CALZADO, FELIPE; PAES LEME, ADRIANA FRANCO; SQUINA, FABIO MARCIO; PRADE, ROLF ALEXANDER; DE LIMA DAMASIO, ANDRE RICARDO. Mapping N-linked glycosylation of carbohydrate-active enzymes in the secretome of Aspergillus nidulans grown on lignocellulose. BIOTECHNOLOGY FOR BIOFUELS, v. 9, AUG 8 2016. Citações Web of Science: 10.

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