Produção e caracterização de células multipotentes e pluripotentes induzidas em Blastocerus dichotomus

• Processo: 14/02439-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 09 de setembro de 2014
• Data de Término da vigência: 07 de setembro de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: José Maurício Barbanti Duarte
• Beneficiário: Luciana Diniz Rola
• Supervisor: Lawrence C. Smith
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Université de Montréal, Canadá
• Vinculado à bolsa: 13/13972-0 - Produção e caracterização de células multipotentes e pluripontentes induzidas em Blastocerus dichotomus, BP.DR
• Assunto(s): Células-tronco pluripotentes induzidas Células germinativas Células-tronco multipotentes Cervos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: botão do chifre | células germinativas | células-tronco multipotentes | Células-tronco Pluripotentes Induzidas | Cervo-do-pantanal | gordura | Biotécnicas da Reprodução Animal

Resumo

A criopreservação de gametas e embriões é de extrema importância para a manutenção de diversidade genética em pequenas populações selvagens, porém estes materiais são de difícil obtenção. Estudos realizados com células-tronco pluripotentes induzidas (iPS) humanas e de camundongo mostraram-se capazes de se diferenciar em células germinais, espermatozoides e oócitos. Estudos sobre iPS em cervídeos são inéditos, logo temos como enfoque neste projeto estabelecer protocolos para a obtenção de linhagens iPS estáveis na espécie Blastocerus dichotomus para produzir gametas viáveis no futuro. Este projeto propõe a derivação de células iPS a partir das linhagens multipotentes (gordura e chifres) e comparação com linhagem unipotente (pele), que será conduzida por meio de transfecção gênica utilizando-se transposons PiggyBac. Os cultivos para derivação das iPS serão feitos em presença de fibroblasto embrionários de camundongo (MEF) bloqueados pela mitomicina, e as colônias selecionadas serão repicadas para manter linhagens para posterior caracterização por meio de testes imunocitoquímicos, RT-qPCR, atividade da fosfatase alcalina, corante lacZ, cariótipo, capacidade de diferenciação in vitro em corpos embrióides, diferenciação em células da linhagem germinativa de fêmeas e avaliação de marcadores dos tecidos oriundos dos três folhetos embrionários. Posteriormente, serão realizados testes para tentar derivar as iPS em gametas feminino e masculino. (AU)