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Avaliação do potencial de crescimento e produção de proteínas recombinantes de células humanas adaptadas para crescimento em suspensão e meios de cultura livres de soro fetal bovino

Processo: 14/01404-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de maio de 2014
Vigência (Término): 05 de outubro de 2018
Área do conhecimento:Engenharias - Engenharia Química - Processos Industriais de Engenharia Química
Pesquisador responsável:Kamilla Swiech Antonietto
Beneficiário:Rafael Tagé Biaggio
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:12/04629-8 - Estabelecimento de uma plataforma de produção de proteínas recombinantes terapêuticas em células humanas, AP.JP
Bolsa(s) vinculada(s):15/10675-0 - Expressão estável e transiente do fator VII da coagulação em células humanas adaptadas para crescimento em suspensão e meios livres de soro fetal bovino, BE.EP.DR
Assunto(s):Proteínas recombinantes

Resumo

A maioria das proteínas recombinantes terapêuticas (biofármacos) vem sendo expressas em células de mamíferos, pois este sistema é capaz de realizar modificações pós-traducionais bem como o enovelamento de proteínas de uma maneira autêntica, gerando uma proteína com correta qualidade terapêutica. Em função da crescente demanda por estes produtos e do alto custo e complexidade dos atuais processo de produção, a indústria tem buscado o desenvolvimento de processos otimizados, capazes de gerar uma proteína com alta produtividade e qualidade terapêutica. Linhagens celulares humanas têm despertado muito interesse pelo fato de serem capazes de produzir proteínas glicosiladas de maneira mais similar às proteínas nativas humanas, evitando possíveis respostas imunogênicas. Por terem um desenvolvimento recente, ainda não foram apropriadamente caracterizadas do ponto de vista de uma futura aplicação comercial. Frente ao exposto, o objetivo principal deste projeto é avaliar o potencial de crescimento e de produção de proteínas recombinantes das células humanas SK-Hep-1, HKB-11 e Huh-7 adaptadas para crescimento em suspensão em meios de cultura livres de soro fetal bovino (SFB) com o intuito de estabelecer uma plataforma de produção de proteínas recombinantes terapêuticas baseada em células humanas promissoras. Para isso, as células SK-Hep-1 e HKB-11 previamente adaptadas e a célula Huh-7, que será adaptada para crescimento em suspensão e meios livres de SFB, serão cultivadas em biorreatores em condições de cultivo representativas da escala industrial. Nestes cultivos serão analisados os parâmetros cinéticos de crescimento e o metabolismo das células. Além disso, será realizada uma análise proteômica comparativa entre as células adaptadas e as não adaptadas buscando um melhor entendimento do mecanismo de adaptação celular. Também será avaliado o potencial de produção da proteína recombinante Fator VII da coagulação (FVII) nas mesmas linhagens adaptadas. Os resultados obtidos serão comparados com o crescimento e a produção de proteína recombinante (FVII) na linhagem comercial HEK293 também adaptada para crescimento em suspensão e meio livre de SFB.