Estudo de biomarcadores de prognóstico e resposta terapêutica em tumores estromais...
- Auxílios pontuais (curta duração)
| Processo: | 13/25787-3 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Doutorado Direto |
| Vigência (Início): | 01 de abril de 2014 |
| Vigência (Término): | 30 de abril de 2016 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica |
| Pesquisador responsável: | Rui Manuel Vieira Reis |
| Beneficiário: | Nathália Cristina Campanella |
| Instituição-sede: | Hospital do Câncer de Barretos. Fundação Pio XII (FP). Barretos , SP, Brasil |
| Bolsa(s) vinculada(s): | 14/09990-6 - Estudo de biomarcadores de prognóstico e resposta terapêutica em tumores estromais gastrointestinais (GISTs), BE.EP.DD |
| Assunto(s): | Biomarcadores Instabilidade de microssatélites Tumores do estroma gastrointestinal Quinases raf |
Resumo Os tumores do estroma gastrointestinal (GISTs) são os tumores mesenquimais mais comuns do trato gastrointestinal. A maioria apresenta mutações que ativam os oncogenes KIT ou PDGFRA, codificadores de receptores de tirosina quinase, induzindo a uma ativação constitutiva de proliferação e sobrevivência celular. O prognóstico dos pacientes com GIST é baseado em que incluem tamanho tumoral, índice mitótico e localização, podendo ser classificados como baixo, intermédio e alto risco. Apesar desta classificação, a evolução tumoral é frequentemente imprecisa. Dessa maneira, o estudo de novos biomarcadores pode ser crucial para a melhor determinação do prognóstico dos pacientes com GIST. A instabilidade de microssatélite (MSI) ocorre em regiões de repetição do DNA gnômico devido à falha no sistema de reparo do DNA e tem sido encontrada em vários tipos tumorais, como o câncer colorretal, onde a presença de MSI é um importante fator de prognóstico. Outra molécula com impacto prognóstico comprovado em múltiplos tumores é a Raf Kinase Inhibitor Protein (RKIP). O gene que codifica a RKIP é considerado um gene supressor de metástases sendo que a perda de expressão está associada à presença de metástase, resistência terapêutica e prior prognóstico em várias neoplasias. Em 2013, foi descoberta a presença de mutações oncogênicas no gene Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) em um conjunto vasto de tumores. Estas mutações são frequentemente associadas com o pior prognóstico de pacientes com diversos tumores. Em GIST, a avaliação destas três moléculas é praticamente inexistente. Neste sentido, o objetivo do presente estudo é elucidar o papel biológico e terapêutico destes três potenciais biomarcadores, MSI, RKIP e TERT em GISTs. Para isso, avaliaremos em uma série de 110 amostras de GISTs as alterações moleculares e imunohistoquímicas dos três potenciais biomarcadores. A presença da MSI será avaliada por meio da PCR pentaplex com os marcadores BAT-25, BAT-26, NR21, NR24 e NR-27 seguida da análise de fragmento no sistema ABI Prism 3500 genetic analyzer e no software GeneMaper 4.1. Ainda, avaliaremos mutações em genes alvos pela mesma metodologia descrita a cima e a expressão das proteínas de reparo de DNA (mismatch repair- MMR) pela técnica de imunohistoquímica. Para a RKIP será avaliado a expressão desta proteína pela mesma técnica citada anteriormente. Para o gene TERT será avaliada a presença de mutações na região promotora nas coordenadas Ch5: 1.295.228 (aqui chamada de C228T) e Ch5: 1.295.250 (C250T) por meio de sequenciamento direto. Ainda, avaliaremos a expressão da proteína TERT por meio de reação imunohistoquímica. Em seguida, avaliaremos o papel biológico e terapêutico dos potenciais biomarcadores RKIP e TERT por meio de experimentos in vitro e in vivo. Será realizado o silenciamento do gene RKIP em uma linhagem de GIST imortalizada (GIST882) para avaliação da viabilidade, apoptose, proliferação, invasão e migração celular por meio de ensaios funcionais. Ao mesmo tempo, a resposta ao fármaco imatinibe será avaliada na linhagem celular silenciada e não silenciada para RKIP. Para o gene TERT, serão construídas duas linhagens celulares estabelecidas (derivadas da linhagem GIST882) que expressem o gene TERT controlado pelos promotores mínimos recombinantes (contendo a mutação em C228T, C250T ou selvagem). Em seguida, todos os ensaios funcionais acima citados assim como a resposta ao fármaco imatinibe será avaliado nas linhagens selvagem e mutada para TERT. Por último, utilizando os clones modificados para RKIP e TERT, acima citados, serão realizados testes in vivo através do modelo de CAM (Chorioallantoic Membrane) para avaliação do tamanho tumoral e angiogênese. As análises estatísticas serão realizadas no software SPSS versão 19.0 Com este trabalho pretendemos contribuir para a identificação de novos biomarcadores que poderão contribuir para o melhor estabelecimento do prognóstico dos pacientes com GIST. (AU) | |