| Processo: |
13/25787-3
|
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Doutorado Direto |
| Vigência (Início): |
01 de abril de 2014
|
| Vigência (Término): |
30 de abril de 2016
|
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas
-
Genética
-
Genética Humana e Médica |
|
| Pesquisador responsável: | Rui Manuel Vieira Reis |
| Beneficiário: | Nathália Cristina Campanella |
|
| Instituição-sede: |
Hospital do Câncer de Barretos. Fundação Pio XII (FP). Barretos , SP, Brasil
|
|
| Bolsa(s) vinculada(s): | 14/09990-6 - Estudo de biomarcadores de prognóstico e resposta terapêutica em tumores estromais gastrointestinais (GISTs),
BE.EP.DD
|
|
| Assunto(s): | Biomarcadores
Instabilidade de microssatélites
Tumores do estroma gastrointestinal
Quinases raf |
Resumo
Os tumores do estroma gastrointestinal (GISTs) são os tumores mesenquimais mais comuns do trato gastrointestinal. A maioria apresenta mutações que ativam os oncogenes KIT ou PDGFRA, codificadores de receptores de tirosina quinase, induzindo a uma ativação constitutiva de proliferação e sobrevivência celular. O prognóstico dos pacientes com GIST é baseado em que incluem tamanho tumoral, índice mitótico e localização, podendo ser classificados como baixo, intermédio e alto risco. Apesar desta classificação, a evolução tumoral é frequentemente imprecisa. Dessa maneira, o estudo de novos biomarcadores pode ser crucial para a melhor determinação do prognóstico dos pacientes com GIST. A instabilidade de microssatélite (MSI) ocorre em regiões de repetição do DNA gnômico devido à falha no sistema de reparo do DNA e tem sido encontrada em vários tipos tumorais, como o câncer colorretal, onde a presença de MSI é um importante fator de prognóstico. Outra molécula com impacto prognóstico comprovado em múltiplos tumores é a Raf Kinase Inhibitor Protein (RKIP). O gene que codifica a RKIP é considerado um gene supressor de metástases sendo que a perda de expressão está associada à presença de metástase, resistência terapêutica e prior prognóstico em várias neoplasias. Em 2013, foi descoberta a presença de mutações oncogênicas no gene Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) em um conjunto vasto de tumores. Estas mutações são frequentemente associadas com o pior prognóstico de pacientes com diversos tumores. Em GIST, a avaliação destas três moléculas é praticamente inexistente. Neste sentido, o objetivo do presente estudo é elucidar o papel biológico e terapêutico destes três potenciais biomarcadores, MSI, RKIP e TERT em GISTs. Para isso, avaliaremos em uma série de 110 amostras de GISTs as alterações moleculares e imunohistoquímicas dos três potenciais biomarcadores. A presença da MSI será avaliada por meio da PCR pentaplex com os marcadores BAT-25, BAT-26, NR21, NR24 e NR-27 seguida da análise de fragmento no sistema ABI Prism 3500 genetic analyzer e no software GeneMaper 4.1. Ainda, avaliaremos mutações em genes alvos pela mesma metodologia descrita a cima e a expressão das proteínas de reparo de DNA (mismatch repair- MMR) pela técnica de imunohistoquímica. Para a RKIP será avaliado a expressão desta proteína pela mesma técnica citada anteriormente. Para o gene TERT será avaliada a presença de mutações na região promotora nas coordenadas Ch5: 1.295.228 (aqui chamada de C228T) e Ch5: 1.295.250 (C250T) por meio de sequenciamento direto. Ainda, avaliaremos a expressão da proteína TERT por meio de reação imunohistoquímica. Em seguida, avaliaremos o papel biológico e terapêutico dos potenciais biomarcadores RKIP e TERT por meio de experimentos in vitro e in vivo. Será realizado o silenciamento do gene RKIP em uma linhagem de GIST imortalizada (GIST882) para avaliação da viabilidade, apoptose, proliferação, invasão e migração celular por meio de ensaios funcionais. Ao mesmo tempo, a resposta ao fármaco imatinibe será avaliada na linhagem celular silenciada e não silenciada para RKIP. Para o gene TERT, serão construídas duas linhagens celulares estabelecidas (derivadas da linhagem GIST882) que expressem o gene TERT controlado pelos promotores mínimos recombinantes (contendo a mutação em C228T, C250T ou selvagem). Em seguida, todos os ensaios funcionais acima citados assim como a resposta ao fármaco imatinibe será avaliado nas linhagens selvagem e mutada para TERT. Por último, utilizando os clones modificados para RKIP e TERT, acima citados, serão realizados testes in vivo através do modelo de CAM (Chorioallantoic Membrane) para avaliação do tamanho tumoral e angiogênese. As análises estatísticas serão realizadas no software SPSS versão 19.0 Com este trabalho pretendemos contribuir para a identificação de novos biomarcadores que poderão contribuir para o melhor estabelecimento do prognóstico dos pacientes com GIST. (AU)
|
|
Publicações científicas
(8)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
CAMPANELLA, NATHALIA C.;
SCAPULATEMPO-NETO, CRISTOVAM;
ABRAHAO-MACHADO, LUCAS FARIA;
TORRES DE OLIVEIRA, ANTONIO TALVANE;
BERARDINELLI, GUSTAVO N.;
GUIMARAES, DENISE PEIXOTO;
REIS, RUI M.
Lack of microsatellite instability in gastrointestinal stromal tumors.
Oncology Letters,
v. 14,
n. 5,
p. 5221-5228,
NOV 2017.
Citações Web of Science: 2.
BATISTA, RUI;
CRUVINEL-CARLONI, ADRIANA;
VINAGRE, JOAO;
PEIXOTO, JOANA;
CATARINO, TELMO A.;
CAMPANELLA, NATHALIA CRISTINA;
MENEZES, WEDER;
BECKER, ALINE PAIXAO;
DE ALMEIDA, GISELE CARAVINA;
MATSUSHITA, MARCUS M.;
CLARA, CARLOS;
NEDER, LUCIANO;
VIANA-PEREIRA, MARTA;
HONAVAR, MRINALINI;
CASTRO, L. IGIA;
LOPES, JOSE MANUEL;
CARVALHO, BRUNO;
VAZ, RUI MANUEL;
MAXIMO, VALDEMAR;
SOARES, PAULA;
SOBRINHO-SIMOES, MANUEL;
REIS, RUI MANUEL;
LIMA, JORGE.
The prognostic impact of TERT promoter mutations in glioblastomas is modified by the rs2853669 single nucleotide polymorphism.
International Journal of Cancer,
v. 139,
n. 2,
p. 414-423,
JUL 15 2016.
Citações Web of Science: 19.
BIDINOTTO, LUCAS TADEU;
TORRIERI, RAUL;
MACKAY, ALAN;
ALMEIDA, GISELE CARAVINA;
VIANA-PEREIRA, MARTA;
CRUVINEL-CARLONI, ADRIANA;
SPINA, MARIA LUISA;
CAMPANELLA, NATHALIA CRISTINA;
DE MENEZES, WEDER PEREIRA;
CLARA, CARLOS AFONSO;
BECKER, ALINE PAIXAO;
JONES, CHRIS;
REIS, RUI MANUEL.
Copy Number Profiling of Brazilian Astrocytomas.
G3-GENES, GENOMES, GENETICS,
v. 6,
n. 7,
p. 1867-1878,
JUL 1 2016.
Citações Web of Science: 2.
PINTO, FILIPE;
CAMPANELLA, NATHALIA C.;
ABRAHAO-MACHADO, LUCAS F.;
SCAPULATEMPO-NETO, CRISTOVAM;
DE OLIVEIRA, ANTONIO T.;
BRITO, MARIA J.;
ANDRADE, RAQUEL P.;
GUIMARAES, DENISE P.;
REIS, RUI M.
The embryonic Brachyury transcription factor is a novel biomarker of GIST aggressiveness and poor survival.
GASTRIC CANCER,
v. 19,
n. 2,
p. 651-659,
APR 2016.
Citações Web of Science: 8.
CAMPANELLA, NATHALIA C.;
PENNA, VALTER;
ABRAHAO-MACHADO, LUCAS FARIA;
CRUVINEL-CARLONI, ADRIANA;
RIBEIRO, GUILHERME;
SOARES, PAULA;
SCAPULATEMPO-NETO, CRISTOVAM;
REIS, RUI M.
TERT promoter mutations in soft tissue sarcomas.
International Journal of Biological Markers,
v. 31,
n. 1,
p. E62-E67,
JAN-MAR 2016.
Citações Web of Science: 5.
CAMPANELLA, NATHALIA C.;
PENNA, VALTER;
ABRAHAO-MACHADO, LUCAS FARIA;
CRUVINEL-CARLONI, ADRIANA;
RIBEIRO, GUILHERME;
SOARES, PAULA;
SCAPULATEMPO-NETO, CRISTOVAM;
REIS, RUI M.
TERT Promoter Mutations in Soft Tissue Sarcomas.
International Journal of Biological Markers,
v. 31,
n. 1,
p. 62-67,
2016.
Citações Web of Science: 0.
CAMPANELLA, NATHALIA C.;
CELESTINO, RICARDO;
PESTANA, ANA;
SCAPULATEMPO-NETO, CRISTOVAM;
DE OLIVEIRA, ANTONIO TALVANE;
BRITO, MARIA JOSE;
GOUVEIA, ANTONIO;
LOPES, JOSE MANUEL;
GUIMARAES, DENISE PEIXOTO;
SOARES, PAULA;
REIS, RUI M.
Low frequency of TERT promoter mutations in gastrointestinal stromal tumors (GISTs).
European Journal of Human Genetics,
v. 23,
n. 6,
p. 877-879,
JUN 2015.
Citações Web of Science: 15.
CAMPANELLA, NATHALIA C.;
PENNA, VALTER;
RIBEIRO, GUILHERME;
ABRAHAO-MACHADO, LUCAS FARIA;
SCAPULATEMPO-NETO, CRISTOVAM;
REIS, RUI MANUEL.
Absence of Microsatellite Instability In Soft Tissue Sarcomas.
PATHOBIOLOGY,
v. 82,
n. 1,
p. 36-42,
2015.
Citações Web of Science: 5.