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Beta-glicosidases intestinais de insetos: especificidade, ativação por compostos hidrofóbicos e arquitetura do sítio ativo

Processo: 14/04895-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de julho de 2014
Vigência (Término): 30 de novembro de 2015
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Clelia Ferreira Terra
Beneficiário:Daniela da Cunha Bataglioli
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:11/51685-8 - A digestão nos insetos: uma abordagem molecular, celular, fisiológica e evolutiva, AP.TEM
Assunto(s):Glicosídeo hidrolases   Cinética enzimática

Resumo

Nosso laboratório há anos vem estudando enzimas que hidrolisam ²-glicosídeos em intestino de insetos. Pretendemos com este trabalho aprofundar 3 aspectos desses assuntos.²-galactosidases: Encontramos galactosidases que são ativadas por substâncias hidrofóbicas. Nossa hipótese é que essas enzimas tenham como substrato natural galactolipídeos de folhas e que a ativação seja importante para deixá-las ativas na proximidade das membranas onde são encontrados seus substratos. Pretendemos clonar o cDNA correspondente e expressar a ²-galactosidase de Tenebrio molitor, estudando sua especificidade e parâmetros de ativação.²-frutosidases: Essas enzimas só foram descritas em Lepidoptera, sendo pouco estudadas. Pretendemos usar a enzima de Spodoptera frugiperda para determinar sua especificidade a substratos, produzir mutantes sítio dirigidos para estudar a modulação do pKa de grupos catalíticos e estudar sua secreção por imunocitolocalização. Sua presença e sítios de expressão em Apis mellifera serão verificados.²-glucosidases: Comparamos várias dessas enzimas cineticamente e pretendemos verificar se essas comparações podem ser reproduzidas utilizando dados estruturais, o que será feito por modelagem molecular e "docking". Para ter certeza sobre a sequência de algumas delas, duas enzimas de Diatraea saccharalis deverão ser expressas e ter seus parâmetros cinéticos determinado. Uma delas aparentemente tem alta atividade sobre O e S glicosídeos. Caso esse resultado se confirme essa propriedade será estudada em maior detalhe.